希爱力/他达拉非调节前列腺癌细胞系中的类固醇激素信号

　　背景：雄激素受体 (AR) 在正常前列腺稳态和前列腺癌 (PCa) 发展中起关键作用，而芳香酶 (Cyp19a1) 的作用尚不清楚。我们评估了希爱力/他达拉非 (TAD) 治疗对这两种蛋白质的影响。方法：雄激素敏感性人 PCa 细胞系 (LnCAP) 在有/没有他达拉非 (10-6M) 和比卡鲁胺 (BCT) (10-4M) 的情况下孵育，以评估对 Cyp19a 的细胞增殖、蛋白质和 mRNA 表达的潜在调节、AR 和雌激素受体-β (ERβ)。

　　结果：他达拉非增加早期 AR 核易位（p< 0.05，暴露 15 分钟后），并增加 AR 转录活性（p< 0.05）和蛋白质表达（p< 0.05) 24 小时后。此外，24 小时后，这种处理上调了 Cyp19a1 和 ERβ mRNA（分别为p< 0.05 和p< 0.005），并导致 48 小时后两者的蛋白质表达增加（p< 0.05）。有趣的是，他达拉非抵消了 BCT 诱导的 Cyp19a1 刺激（p< 0.05），但没有改变 BCT 诱导的对 AR 蛋白表达的影响。

　　结论：我们首次证明他达拉非可以显着调节 PCa 细胞中的 AR 表达和活性、Cyp19a1 和 ERβ 表达，表明这些蛋白质具有特定作用。此外，他达拉非增强了 BCT 的抗增殖活性，为 PCa 的治疗开辟了新的临床方案。

　　本文呈现的结果首次证明希爱力/他达拉非可以在体外调节前列腺癌细胞中的 AR 表达。我们还表明他达拉非 诱导了稳定并减少了 AR 的降解，AR 在细胞核内更有效地积累。有趣的是，这种作用可以通过增强 ADT 的治疗效果导致他达拉非 的潜在抗癌作用。

　　PCa 是成年男性死亡的主要原因，CRPC 对常规化疗的治疗反应通常较低。PDE5 和 cGMP 信号通路在正常和癌性前列腺组织中的表达及其可能参与致癌作用仍然存在争议。他达拉非、西地那非和伐地那非用于通过特异性抑制 cGMP 特异性 PDE5 来治疗勃起功能障碍 (ED)，该 PDE5 负责海绵体内 cGMP 的降解。目前，PDE5i 主要用作良性前列腺增生 (BPH) 相关下尿路症状 (LUTS) 的日常治疗，它们会降低腺体的自发收缩力，从而降低泌尿生殖道的肌肉张力即使尚未明确记录前列腺组织的特定抑制生长模式。菲比等人。报道了 PDE5 免疫定位主要位于 BPH 受试者的大鼠和人前列腺的纤维肌肉基质和血管（内皮细胞和干细胞）中；相比之下，ückert 等人。在人类前列腺癌患者的腺体和腺体下区域也有免疫定位的 PDE5 表达。张等人报道了增生的人类前列腺中 PDE5 的上调，从而为 PDE5 抑制剂治疗有/无 ED 的 LUTS/BPH 患者的高效性提供了理论依据。尽管 PDE5 抑制剂主要在 PCa 的肿瘤治疗后使用，但文献中尚未详尽报道前列腺腺癌中的 PDE5 免疫定位研究。为了正确定位 PDE5 表达，Bisegna 等人最近在增生性前列腺样本的基质区室中发现 PDE5 过表达。有趣的是，他们的免疫组织化学研究显示，与正常 (8%) 或增生样本 (11%) 相比，22% 的 PCa 样本在上皮区室中表达 PDE5，并且这种阳性与格里森分级系统无关。最近的数据表明，西地那非和伐地那非可能会诱导对多柔比星（或其他拓扑异构酶 II 抑制剂）的非 PDE5 依赖性细胞凋亡致敏，从而表明联合治疗是抗 CRPC 发展的重要策略。鉴于我们之前发现他达拉非在人类脂肪细胞、成骨细胞和骨骼细胞系中调节 Cyp19a1 和 AR，分别研究了他达拉非在不同细胞模型中的潜在作用。在该 PCa 细胞系中，LNCaP 对 他达拉非的急性暴露不影响细胞活力和增殖率。TAD 上调 AR 蛋白表达和转录活性，而不影响 PCa 细胞的代谢和增殖。几项研究表明 PCa 是由 AR 驱动的，AR 是一种属于核受体家族的配体依赖性转录因子。多种促生长和存活通路与 AR 信号相互作用并参与 PCa。在对 ADT 产生耐药性的 PCa 患者中测得的前列腺特异性抗原 (PSA) 水平升高，表明 AR 信号仍然是药物干预的重要目标。目前正在临床研究中研究使用化合物干扰 AR 信号的方法。目前正在进行针对程序性细胞死亡蛋白 1 (PD-1) 或程序性死亡配体 1 (PD-L1) 的药物的早期临床研究。正如在其他细胞模型中已经证明的那样，我们确认 他达拉非在核水平暴露 LnCAP 细胞 24 小时后增加 AR 表达；并促进 AR 的核易位触发其转录活性。此外，与 AR 受体阻滞剂 BCT 共同治疗后，LnCAP 增殖在 24 和 48 小时显着下降，因此表明该药物在抑制 AR 介导的 PCa 细胞生长方面具有推定的附加作用。

　　AR 是 PCa 预防和治疗的经典靶点，但最近雌激素及其受体也与肿瘤的发展和进展有关。越来越多的证据表明，局部雌激素信号机制是前列腺癌发生和肿瘤进展所必需的。由于全身雌激素耗竭，芳香酶抑制剂 (AI) 对人类前列腺的影响在临床上越来越重要，因为它们越来越多地用作绝经后乳腺癌妇女的辅助治疗。Cyp19a1 将雄激素转化为雌激素，雌激素在 PCa 病理生理学中的作用尚未确定。Bonkhoff 证实了雌激素可能在调节男性前列腺生长中起主要作用的假设。详细地说，雌激素 ERβ 是人类前列腺中最普遍的 ER，而雌激素受体 α (ERα) 仅限于前列腺上皮和基质细胞的基底细胞。在高级别前列腺上皮内瘤变 (HGPIN) 中，ERα 可能被上调，而 ERβ 可能会部分丢失，这表明其具有作为肿瘤抑制因子的潜在作用。ERβ 通常保留在激素初始和转移性前列腺癌中，但在去势抵抗性疾病中部分丢失。在 PCa 进展和激素难治性疾病期间 ERα 和 ERα 调节基因（例如，孕酮受体、PS2、TMPRSS2-ERG 融合和 NEAT1）的逐渐出现表明这些肿瘤可以通过使用雌激素和孕激素进行生长来绕过 AR。事实上，在 CRPC 中 Cyp19a1 表达在肿瘤样本中显着增加。在 PCa 细胞系中，雄激素受体拮抗剂 BCT 增加了 Cyp19a1 表达和 ERβ 转录活性。众所周知，与细胞内受体结合的类固醇和药物可能具有钟形曲线取决于分子的浓度。因此，我们认为他达拉非加 BCT 组合可能会产生类似的效果，并且在高浓度下会产生抑制作用。此外，已经表明，当两种药物的组合导致比预期更小的作用时，两种药物的组合使用可以发挥协同作用或拮抗作用。此外，预测 CRPC 与神经内分泌分化的基因表达特征揭示了雌激素信号的过度表达。因此，Cyp19a1 表达的增加可能是 CRPC 发展的潜在机制之一。

　　我们的研究首次证明，长期暴露于 BCT（48 小时）会导致 LnCAP 细胞中 Cyp19a1 mRNA 的显着增加，而这种增加可通过与希爱力/他达拉非共同处理而逆转。事实上，阿那曲唑和选择性 AI 已被提议用于治疗患有晚期前列腺癌的男性，但目前，结果仍然不一致。Attia 和 Ederveen 证明前列腺细胞中 ERβ 的增加刺激细胞凋亡并减少细胞癌细胞增殖，在肿瘤病变中发挥潜在的有趣药理学作用。我们在此推测雌激素水平的局部增加可能会激活 ERβ 细胞内途径，并且由于 Cyp19a1 的诱导，长期暴露于 BCT 可能会导致 ERβ 的丢失；与他达拉非联合治疗能够阻止这些作用，因此可以假设维持雄激素对抗雄激素治疗的反应。事实上，他达拉非增强了 BCT 在 LNCaP 细胞中的抗增殖活性。

　　该研究首次报道了希爱力/他达拉非在 PCa 细胞系模型中的新作用，与先前在其他体外细胞模型中描述的作用相同。本文提供的数据表明，希爱力/他达拉非可能通过增加体外 PCa 细胞中 AR 蛋白的表达和活性，从而增加对抗雄激素化合物的反应。他达拉非治疗广泛用于治疗不知道患有 PCa 的患者的 ED。这些转化保护作用是否适用于减缓 PCa 向 CRPC 的临床进展仍有待阐明。微信扫描下方二维码了解更多：