达克替尼Dacomitinib可能是ABCG2的底物

　　抑制ABC转运蛋白的药物转运功能是在癌症治疗中逆转耐药性的一种有前途的策略。迄今为止，已经致力于开发ABC转运蛋白抑制剂。然而，由于副作用或意外的药代动力学相互作用，这些ABC转运蛋白抑制剂在临床实践中的应用受到限制。多年来，我们一直在研究使用分子靶向TKI来抑制ABC转运蛋白，从而规避MDR。我们发现，TKIs可以在低浓度下抑制ABC转运蛋白的药物外流活性，并增强化疗药物在癌细胞中的抗癌作用。因此，我们推测TKIs可能会被重新定位为ABC转运蛋白的抑制剂，从而在临床上规避MDR。　　

　　达克替尼是一种有前途的第二代EGFRTKI，在体外表现出强大的抗癌活性。更重要的是，III期临床试验的结果还显示，与第一代EGFRTKI厄洛替尼相比，达可替尼可以显着改善疾病PFS。此外，在大多数的临床和分子子集观察PFS益处，尤其是KRAS野生型/EGFR的任何状态，KRAS野生型/EGFR野生型和突变体EGFR。在这项研究中，我们研究了达克替尼在体外和体内对ABCG2介导的MDR的规避作用。　　

　　达克替尼首先在具有定义的ABCG2过表达的癌细胞模型中评估了MDR逆转。浓度低于1μM的达克替尼对细胞增殖没有明显影响，但发现它在两种药物选择过表达的ABCG2过表达的癌细胞系（H460/MX20和S1-MI-80）中显着增强了其他ABCG2底物抗癌药的抗癌活性。）和两个ABCG2稳定转染的HEK293细胞（表达野生型ABCG-482-R2或突变型ABCG-482-T7）。　　

　　MDR逆转是特异性的，因为在亲代癌细胞（H460和S1）或骨架载体转染的HEK293/pcDNA3.1细胞中未观察到明显的作用。此外，达克替尼没有显着改变非ABCG2底物对癌细胞的抗癌活性。在H460/MX20细胞异种移植裸鼠模型中也已在体内验证了有希望的体外数据。还发现达克替尼在H460/MX20细胞异种移植物中可显着增强ABCG2底物药物拓扑替康的抗肿瘤活性，而不会增加毒性。体外和体内数据表明，达克替尼可能是ABCG2抑制剂的理想候选药物，这主张进一步研究达克替尼与常规抗癌药联合化疗对ABCG2过表达的癌症患者的作用。ABCG2介导的MDR逆转可能涉及外排功能的抑制或转运蛋白表达的降低。　　

　　为了解释这一点，通过流式细胞术测量了过量表达ABCG2的癌细胞中的药物蓄积和外排活性。数据表明达克替尼抑制了ABCG2底物从细胞中流出，从而导致ABCG2底物（如Rho123，DOX和Hoechst33342）的细胞内蓄积增加。由于ABCG2的药物外排取决于来自ATPase的ATP水解产生的能量，我们在存在或不存在达克替尼的情况下检测到ABCG2ATPase的活性。达克替尼以浓度依赖性方式刺激ATPase活性，表明达克替尼可能是ABCG2的底物。这与dacomitinib在[125I]-IAAPABCG2的光亲和标记。达克替尼可能与ABCG2的ATP结合位点结合。　　

　　在耐多药的ABCG2过表达癌细胞H460/MX20和S1-MI-80中，以达克替尼以MDR逆转浓度处理48小时后，还评估了mRNA和蛋白水平的ABCG2表达。实时PCR和Western印迹分析的数据表明，达克替尼治疗不会改变ABCG2的mRNA和蛋白表达水平。因此，研究中观察到的MDR逆转可能主要是由达克替尼对ABCG2外排活性的抑制介导的。　　

　　此外，我们发现达克替尼尼在1μM的MDR逆转浓度下不会阻止H460/MX20细胞，S1-MI-80细胞及其亲代细胞中AKT和ERK的磷酸化。因此，达克替尼在MDR细胞中增强抗癌药的细胞毒性作用与抑制EGFR或Her-2受体及其下游信号通路无关。详情请扫码咨询：