达克替尼/多泽润耐药克隆中的继发性EGFR突变

　　为了阐明继发性EGFR突变作为耐药机制和这些突变的频率，我们通过ENU诱变生成了耐药克隆。总共获得了171个抗性克隆。T790M突变占二级突变的90％（171个中的154个）。在低剂量（20 nM）设置下，L858R突变细胞（35个中的四个）和G719A突变细胞（50个中的12个）产生了C797S突变。即使高剂量的达克替尼（多泽润），也有一个G719A突变克隆产生了C797S。

　　EGFR二级突变和相应蛋白质结构的测序色谱图。在表达通过长期暴露获得对200nM达可替尼的抗性的Del19和Ba / F3细胞的亲代Ba / F3细胞中EGFR的测序色谱图。在达克替尼耐药细胞中，第790位密码子的苏氨酸（ACG）被蛋氨酸（ATG）取代。（B）通过N-乙基-N-亚硝基脲（ENU）诱变产生的表达L858R突变的亲代Ba / F3细胞和达克替尼耐药克隆的EGFR测序色谱图。半胱氨酸（TGC）密码子797被丝氨酸（AGC）取代。将已鉴定的EGFR突变的每个氨基酸残基定位在具有达克替尼的EGFR晶体结构上。达科替尼与C797形成共价键。T790和C797位于EGFR三磷酸腺苷结合口袋中。

　　为了阐明T790M和C797S突变发生的时间是否不同，比较了用20 nM达科替尼和ENU诱变建立的T790M和C797S突变克隆的耐药时间。获得T790M和C797S突变的L858R突变克隆的抗性中位时间均为15天（p= 0.93）。同样，获得T790M和C797S突变的G719A突变克隆的抗性中位时间均为16天（p= 0.86）

　　为了克服对达克替尼治疗产生的T790M突变，测定了具有Del19的Ba / F3细胞与通过长期暴露于不加ENU的达科米替尼而建立的T790M突变的体外敏感性。尽管抑制达克替尼50％（IC50）的浓度为483 nM，但奥西替尼的浓度仅为2.8 nM。

　　随后，将EGFRL858R加C797S突变逆转录病毒引入Ba/F3细胞，以表征C797S突变。表达L858R加C797S突变的细胞对吉非替尼和厄洛替尼均敏感。吉非替尼和厄洛替尼的IC50值分别为2.8和9.9 nM。C797S突变细胞显示出对达科替尼的中等耐药性，考虑到达科替尼在血浆中的谷浓度，IC50为23.8 nM。现在达克替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。