丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的一种肝脏疾病，影响到全世界7100万人，但没有获得许可的预防感染的疫苗。这里，我们生成的四个小说alphavirus-basedDNA-launchedself-amplifyingRNA复制子(DREP)疫苗表达结构core-E1-E2或非结构化p7-NS2-NS3丙肝病毒蛋白质的基因型1放置一甲病毒启动子的控制下，有或没有一个alphaviral转化剂(分组DREP-丙肝或DREP-e-丙肝分别)。
众所周知，DREP载体可以诱导交叉启动，并通过细胞凋亡进一步刺激免疫反应，在这里我们证明了它们可以有效地触发转染细胞中的凋亡相关蛋白。免疫的小鼠DREP疫苗作为启动免疫，后跟一个不等的增加与修改牛痘病毒重组安卡拉(MVA)向量表达几乎完整的基因组的丙肝病毒(MVA-丙肝)诱导有效的和持久的丙肝病毒的CD4+和CD8+T细胞的免疫反应，明显比那些同源MVA-丙肝'/提高免疫，与DREP-e-丙肝/MVA-丙肝组合最免疫原性方案。
丙肝特异性CD4+和CD8+T细胞应答具有高度多功能性，具有效应记忆表型，主要分别针对E1-E2和NS2-NS3。此外，DREP/MVA-丙肝免疫方案比同源MVA-丙肝免疫方案诱导的丙肝E2蛋白抗体水平更高。总的来说，这些结果提供了一种通过诱导高水平的丙肝特异性T细胞反应和体液反应来对抗丙肝的免疫方案。这些发现加强了结合使用以drep为基础的载体和MVA-丙肝作为有前景的预防和治疗性丙肝疫苗。
丙肝病毒是一个全球卫生问题，因为全世界有7100多万人受到慢性感染。直接作用的抗病毒药物可以治愈大多数患者的丙肝病毒感染，但由于这些药物的高昂费用和耐药突变体的出现，它们并不是根除病毒的可行和负担得起的战略。因此，研制疫苗是一个迫切的目标，需要努力了解保护丙肝病毒清除的相关关系。在此，我们首次描述了基于表达丙肝抗原的甲病毒DNA复制子的新型丙肝疫苗的生成。我们证明强大的T细胞免疫反应，以及体液免疫反应，可以实现对丙肝病毒在小鼠体内通过组合不同的'/提高免疫协议组成的管理甲病毒DNA复制子向量作为启动免疫，后跟一个增强改性牛痘病毒重组安卡拉向量表达丙肝抗原。
丙型肝炎病毒(丙肝)是一种包膜、阳性、单链RNA病毒，属于黄病毒科。丙肝病毒的开放阅读框编码一个大型的多蛋白，进一步加工成八成熟的蛋白质，包括结构(核心、E1和E2)和非结构化(p7NS2，NS3、NS4和NS5蛋白。根据世界卫生组织(世卫组织)，估计至少有7100万人感染了慢性丙肝病毒在2015年和400000年的死亡是由于肝硬化和肝细胞癌，慢性所致的两种主要丙肝源性并发症。在过去的几年里，一些直接的抗病毒药物(DAAs)已经开发和批准用于治疗，并能消除超过95%的病人治疗丙肝病毒。
然而，DAAs并不代表一个可行的解决方案根除丙肝病毒有几个原因:(i)有一个大比例的沉默感染治疗而被高度传染性；DAAs的高昂费用使低收入国家无法获得它们；DAAs未能防止再次感染；按实际使用量付费(iv)不会阻止耐药变异的出现。因此，只有一个有效的预防性或治疗性疫苗是一个可行的解决方案来控制丙肝病毒，和需要努力了解丙肝病毒的免疫原性和保护的相关为了开发优化候选疫苗，实现一个有效的全球解决方案对丙肝病毒的要求。
几个候选疫苗对丙肝病毒已经开发使用不同的平台，如蛋白质、腺病毒，DNA，或修改牛痘病毒安卡拉(MVA)的疫苗。DNA疫苗具有许多优点比如DNA的简单操作，生成、运输、存储以及生产成本低，稳定性高，和良好的安全性。然而，DNA疫苗的一个重要缺点是单独接种时免疫原性较低，需要多次加强剂量或其他药剂来增强免疫效果的持续时间。此外，DNA疫苗引发的免疫反应强度可能有限，可能需要另一种载体如mva疫苗来增强。
MVA是一种减毒的正形病毒，在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)中传代570多次后产生，并已在几个临床前和临床试验中对多种感染性疾病进行了测试，包括丙肝。此外，基于MVA的载体产生的免疫反应可以通过DNAprime/MVA助推方案得到改善。在这方面，我们之前研究了一种基于mva的候选丙肝疫苗(称为MVA-丙肝)的免疫原性，该疫苗表达了所有1a基因型的丙肝蛋白，使用了异源和同源的prime/boost免疫方案。我们表明，不同的方案(DNA编码的核心，E1、E2和NS3丙肝病毒蛋白启动后跟MVA-丙肝作为提高)诱导显著高于自适应和记忆丙肝病毒的CD4+和CD8+T细胞免疫反应比两剂MVA-丙肝(同源'/刺激方案)，确认有益使用DNA/MVA免疫方案。然而，没有发现DNA-丙肝/MVA-丙肝抗体，这表明，使用常规哺乳动物表达的DNA质粒进行免疫接种，应该使用改进的DNA载体，以产生更高的免疫应答。
以阿尔法病毒为基础的DNA启动复制子(DREPs)是一种裸DNA载体，在进入细胞后，它会表达一种RNA复制子，这种RNA复制子是一种自我放大的重组RNA分子。它们编码一种甲病毒复制酶，该酶能扩增RNA复制子，转录编码异源抗原的mRNA，并生成双链RNA分子，刺激几种模式识别受体(PRR)。PRR刺激导致I型干扰素(IFN)的诱导，并通过在MHCI类分子上交叉引物抗原表位来触发有效的细胞凋亡。此外，有报道称，DREP载体可以通过在上游和与异种抗原的框架内添加翻译增强子进行优化，从而提高异种抗原的表达，增强抗原特异性的体液免疫反应。
因此，由于这些特征，与传统DNA疫苗相比，DREP复制子表达高水平的瞬态异源基因，在体内诱导更高的抗原特异性免疫反应，因此是疫苗开发的诱人载体。此外，一些临床前研究表明，使用DREP平台作为启动免疫，再加上MVA的增强，可诱导针对几种传染病的强效抗原特异性免疫反应，如由基孔肯亚病毒、埃博拉病毒和艾滋病病毒引起的免疫反应。然而，目前还没有针对丙型肝炎病毒开发出DREP载体，而且由于缺乏有效的丙型肝炎疫苗，DREP/MVA方法的研究可以成为丙型肝炎疫苗开发的一个进步。
在本研究中，我们生成并鉴定了四种新的编码丙肝抗原的DREP载体(结构核心-e1-e2或非结构p7-NS2-NS3蛋白)，它们被置于没有或存在翻译增强子的框架中(分别分组在DREP-丙肝或DREP-e-丙肝中)。我们以MVA-丙肝作为增强免疫方案，以MVA-丙肝/MVA-丙肝方案作为对照，分析了它们在小鼠中的免疫原性，以获得特征明确的丙肝特异性体液和细胞免疫反应。
结果表明，异源的DREP/MVA免疫方案比同源的MVA-丙肝启动/增强免疫方案显著提高了丙肝特异性CD4+和CD8+T细胞应答。最具免疫原性的免疫程序是DREP-e-丙肝启动免疫，随后是MVA-丙肝增强免疫。此外，DREP/MVA-丙肝免疫诱导的丙肝E2蛋白抗体水平高于两剂MVA-丙肝。我们的研究结果表明，新型基于drep的丙型肝炎疫苗与MVA-丙肝结合是增强丙型肝炎特异性T细胞和体液免疫原性的有效途径，形成了一种有前景的丙型肝炎疫苗策略。详情请扫码咨询：
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