布加替尼/布吉他滨在肺癌细胞系中的有效性

　　然后，我们评估了布加替尼（布吉他滨）和其他 TKI 对三重 del19 阳性肺癌细胞系的有效性。CellTiter-Glo 检测表明，吉非替尼、奥希替尼和布加替尼抑制了 PC9 亲本细胞（单独的 del19）和双突变（T790M/del19）或三突变（C797S/T790M/del19）细胞的生长，其模式类似于在表达相应突变类型的 Ba/F3 细胞中观察到的结果。在蛋白质印迹中，只有布加替尼抑制了 PC9 三重突变细胞中的 EGFR 磷酸化及其下游信号传导。

　　与在 PC9 亲本和 T790M 细胞中观察到的 EGFR 信号通路减弱相比，阿法替尼和奥希替尼并未减少这些细胞中的信号通路。AZD3463 在使用蛋白质印迹评估的这些 PC9 细胞中显示出轻度活性。此外，这三种 EGFR-TKI 在源自携带 T790M/del19 的厄洛替尼失败患者的 MGH121 亲本细胞和表达三重 del19 的 MGH121 抗性 2 细胞中显示出相同的有效性模式，这些细胞被确立为 WZ-4002 抗性 MGH121 细胞体外。

　　为了证实布加替尼对三重突变 EGFR 的优越活性，我们通过将布加替尼或奥希替尼施用于裸鼠进行体内实验，其中裸鼠已皮下注射表达 EGFR-triple-del19 的 PC9 肺癌（PC9-triple 突变）细胞。结果，与载体对照和奥希替尼治疗组相比，用布加替尼治疗的小鼠显示出对 PC9-三重突变细胞生长的显着抑制，而没有明显的毒性。在从小鼠获得的肿瘤样品中，布加替尼实际上抑制了 EGFR 的磷酸化及其下游信号传导。这在体内在使用表达 EGFR-triple-del19 的 Ba/F3 细胞代替 PC9 细胞的类似实验中证实了疗效。值得注意的是，奥希替尼（50 mg kg-1）和布加替尼（75 mg kg-1）都成功抑制了表达 T790M/del19 的 PC9 细胞的生长。这些结果表明，无论细胞类型如何，布加替尼都利用了三重突变，将成为克服第三代 EGFR-TKI 获得性耐药的有希望的候选药物。为了获得更好的治疗效果和肿瘤缩小，根据我们在未来研究中的结构分析，开发比布加替尼更有效的抑制剂非常重要。

　　参考之前的报告，该报告指出阿法替尼+西妥昔单抗组合对临床前模型和患者中第一代 EGFR-TKI 的获得性耐药有效，我们评估了布加替尼和西妥昔单抗或帕尼单抗的组合对抗三突变 EGFR。使用 Cell-Titer Glo 试剂盒进行的细胞活力测定表明，西妥昔单抗增强了 布加替尼或 AP26113 类似物对三重 del19 Ba/F3 细胞的功效，IC50降低了约三倍，而在奥希替尼中没有获得协同效益。使用蛋白质印迹观察到布加替尼与西妥昔单抗联合对下游途径的增强抑制。在细胞活力测定和蛋白质印迹分析中，这些效应在三重突变肺癌细胞系中重现。另一种抗EGFR抗体，帕尼单抗与布加替尼组合，表明类似的生长抑制。

　　为了进一步了解联合抗EGFR抗体的益处，我们评估了西妥昔单抗、布加替尼和布加替尼+西妥昔单抗联合治疗0、6、24和48小时后PC9三突变细胞中EGFR的细胞表面表达。通过流式细胞术对处理过的细胞进行的 EGFR 表达分析表明，随着时间的推移，布加替尼 + 西妥昔单抗的细胞表面 EGFR 水平显着降低，而单独使用西妥昔单抗则适度降低，但单独使用布加替尼则没有降低。对相应处理细胞的蛋白质印迹分析表明，当细胞用布加替尼和西妥昔单抗联合处理时，西妥昔单抗实现的总细胞 EGFR 降低得到加强，并且这种联合也增强了对 EGFR 磷酸化和下游信号传导的抑制。此外，相同的实验证实了使用三重 del19 突变的 EGFR 表达 MGH121-res2 细胞抑制总和细胞表面 EGFR 表达。

　　总之，我们发现布加替尼在集中药物筛选方案中对三突变 EGFR 有效，并在体内和体外测定中证实了其活性。该活性依赖于ATP竞争方式，对野生型EGFR的影响较小。与抗EGFR抗体联合治疗在体外和体内显示出比单药治疗更优的活性无毒性。构效关系表明布加替尼的功效超过其类似物，确定了几个关键的基本结构和官能团，例如计算机模拟预测的氧化膦基团。

　　模拟不仅表明布加替尼的构象以相容的方式结合三突变 EGFR ATP 结合口袋，而且还表明在未来的方向上通过部分取代开发更有效的抑制剂的潜力。虽然布加替尼单一疗法的效力似乎并不完全令人满意，但与抗 EGFR 抗体的组合显着降低了 IC50通过诱导表面和总 EGFR 表达的降解来对抗三突变 EGFR，导致三突变 EGFR 携带细胞的肿瘤缩小并显着延长异种移植小鼠的存活。鉴于目前布加替尼的研发已进入临床试验后期，抗EGFR抗体目前已广泛用于肺癌以外的多种癌症的临床治疗，本研究结果应有助于克服对第三代EGFR的获得性耐药。现在布加替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。