布加替尼/布吉他滨克服了EGFR三重突变的耐药性

　　为了研究能够克服三重突变EGFR的候选者，我们进行了重点药物筛选，以使用CellTiter-Glo测定检查它们对 Ba/F3 细胞中每种类型的 EGFR-del19 突变的功效。重点药物筛选中使用的30种药物不仅包括 EGFR-TKIs，还包括靶向其他酪氨酸激酶或丝氨酸/苏氨酸激酶的激酶抑制剂，这些激酶抑制剂现已在临床上可用或正在布加替尼（布吉他滨）临床试验中进行评估。

　　显示了重新利用抑制剂以抵抗疾病相关或耐药突变激酶的潜力。在 TKI 中，预计只有 布加替尼和普那替尼对 EGFR-triple-del19 具有抑制活性，在 100 nM 时抑制约 50% 的生长。然而，通过 CellTiter-Glo 测定评估的普那替尼针对三重 del19 的效力令人失望，其 IC50值与亲本 Ba/F3 细胞中的IC50值几乎相同。然后，我们使用 CellTiter-Glo 试验评估了 布加替尼在 T790M/del19 和三重 del19 突变的表达 EGFR 的 Ba/F3 细胞中的疗效，与其他临床可用的 EGFR-TKI 相比。该测定表明，只有布加替尼 抑制表达三重 del19 突变的 Ba/F3 细胞的生长，IC50较低（<100 nM）。

　　添加 IL-3 作为原始存活信号通路激活剂抵消了 布加替尼的这种抑制作用。布加替尼在三重 del19 中的效力通过蛋白质印迹证实，与阿法替尼和奥希替尼对 EGFR 磷酸化缺乏抑制相反，蛋白质印迹显示 EGFR 磷酸化及其下游信号通路以剂量依赖性方式降低。尽管布加替尼在单独表达 EGFR-del19、T790M/del19 或 C797S/del19 的 Ba/F3 细胞中也显示出可接受的细胞生长抑制和 EGFR 信号通路抑制活性，但其对 C797S/del19 的疗效仅优于奥希替尼.在表达由 L858R 激活的突变 EGFR（单独 L858R、T790M/L858R、C797S/L858R 和 C797S/T790M/L858R（三重 L858R））的 Ba/F3 细胞中使用相同设置的 EGFR-TKI 进行细胞生长抑制测定和蛋白质印迹分析显示布加替尼在 EGFR-L858R 系列中也有效，但不如 del19，在表达由 del19 激活的相应 EGFR 突变类型的 Ba/F3 细胞中观察到类似的功效模式。

　　为了评估布加替尼是否通过 ATP 竞争作用于 EGFR，并比较其在三突变型 EGFR 和野生型 EGFR 之间的活性，使用 ADP-Glo 试剂盒进行了体外激酶测定。该测定显示的激酶活性抑制曲线随着三重突变型和野生型 EGFR 中 ATP 浓度的变化而变化，表明布加替尼竞争性地影响了 EGFR 激酶结构域的 ATP 结合位点。布加替尼对三重突变EGFR的更高效力通过为 10 μM ATP 计算的 IC50值得到证实，三重 L858R的 IC50值比野生型低约10 倍。

　　此外，与每种药物的 IC50值相比，布加替尼对无 EGFR 突变的细胞系的抑制活性低于阿法替尼和奥希替尼，尤其是在野生型 EGFR 扩增的 A431 细胞中。在 KRAS 突变的 A549 或 H460 细胞中，所有这些抑制剂都具有高 IC50值。从这些结果来看，与阿法替尼或什至奥希替尼相比，布加替尼有望具有与野生型 EGFR 抑制相关的更好的毒性特征。现在布加替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。