上皮间质转化导致的克唑替尼(Crizotinib)耐药

　　上皮间质转化（EMT）与对许多化学治疗药物（包括EGFR酪氨酸激酶抑制剂）的敏感性降低相关。在这里，我们研究了这种降低的敏感性是否也导致了对克唑替尼（Crizotinib）的耐药性，克唑替尼是一种表现出EML4-ALK易位的肺癌ALK抑制剂。我们建立了一个耐克唑替尼的亚系（H2228 / CR），该子系是通过长期暴露于浓度不断增加的克唑替尼而从亲本H2228细胞系衍生而来的。分析了与EMT相关的特征，包括形态，EMT标记蛋白和细胞迁移率。与H2228细胞相比，H2228 / CR细胞的生长独立于EML4-ALK，并且H2228 / CR细胞对TAE-684（第二代ALK抑制剂）表现出交叉耐药性。在H2228 / CR细胞中，纺锤形细胞的表型发生了变化，并伴有E-钙粘蛋白的减少，波形蛋白和AXL的增加。此外，H2228 / CR细胞显示出TGF-β1的分泌和表达增加。H2228 / CR细胞的侵袭和迁移能力显着提高。对亲代H2228细胞进行TGF-β1处理72小时可诱导可逆的EMT，导致克唑替尼耐药，但通过去除TGF-β1可逆转。siRNA处理抑制H2228 / CR细胞中波形蛋白恢复了对克唑替尼的敏感性。此外，类似于亲代H2228细胞，这些抗性细胞对Hsp90抑制剂仍然高度敏感。

　　克唑替尼是一种口服药物，最初被开发为ac-Met激酶抑制剂。但是，由于发现克唑替尼与其他受体酪氨酸激酶（包括ALK和ROS1）具有交叉反应性，因此已在ALK阳性肺癌患者中进行了积极评估，从而导致美国食品和药物管理局（FDA）加速批准其为ALK抑制剂。根据在美国临床肿瘤学会（ASCO）第48届年会上发表的全球II期研究结果，对克唑替尼的总体缓解率为59.8％，中位无进展生存期为8.1个月。

　　尽管克唑替尼治疗ALK阳性肺癌的疗效令人印象深刻，但大多数患者最终仍会产生获得性耐药。在我们目前的研究中，我们证明EMT可能有助于抵抗ALK抑制剂，包括克唑替尼和TAE-684，而HSP90抑制剂在H2228细胞中仍保持活性，而与EMT无关。EMT与干细胞样特征的获得，癌症进展以及对化学疗法的抗性有关。我们先前曾报道对吉非替尼的获得性耐药会导致NSCLC细胞和患者组织中的EMT。此外，我们发现AXL和EMT的激活增加与体外和体内相关在EGFR突变型肺癌模型中获得了对厄洛替尼的耐药性。同样，H2228 / CR细胞表现出增加的AXL表达和活性。尽管对AXL的抑制无法克服对克唑替尼的耐药性，但细胞迁移和侵袭均下降。该发现表明，AXL信号传导可能不直接参与这些细胞的克唑替尼抗性。

　　为了支持我们目前的研究结果，Sang等人先前通过EMT产生了对克唑替尼耐药的H3122细胞。在该研究中，上皮标志物减少，而波形蛋白，蜗牛，Notch 1，caveolin和Src的表达上调。形态学变化也与EMT兼容。这些细胞仍然对ganetespib敏感，ganetespib是Synta Pharmaceuticals Corp（马萨诸塞州列克星敦）开发的另一种HSP90抑制剂，而其他几种ALK抑制剂（例如CH5424802，ASP3026和TAE684）无效。这些结果几乎等于我们目前的观察结果。尽管他们确实报告了ALK融合蛋白对ganetespib诱导的去稳定作用仍然敏感，但并未解释HSP90抑制剂对EMT细胞的有效性。有时被误解为克服ESP中HSP90抑制剂的作用是由ALK融合蛋白引起的。由于它们完全依赖于ALK信令，如本研究所示，HSP90抑制剂对TGF-β1信号的抑制作用可以解释其药物作用。有趣的是，我们还发现通过用HSP90抑制剂处理H2228 / CR细胞可以恢复E-cadherin表达的降低。这可能是由HSP90抑制剂逆转EMT驱动力的能力引起的。

　　总之，应将EMT视为与克唑替尼（Crizotinib）相关的可能的获得性耐药机制，并且使用HSP90抑制剂可能是治疗EMT的有前途的选择。需要进一步的研究，包括临床样品，以验证我们的结果。微信扫描下方二维码了解更多：