达克替尼dadcomitinib在非小细胞肺癌中的1期研究详情

　　在28天的周期中，患者以不同剂量的口服达克替尼和PD-0325901进行治疗。起始剂量是基于先前对两种化合物进行单剂1期研究的数据，并考虑了协同毒性的潜力。剂量水平1连续30天每日一次（QD）包含30毫克达克替尼（dadcomitinib），这是单药治疗EGFR阳性NSCLC的最大耐受剂量和推荐起始剂量的67％，两次PD-0325901两次在每个28天周期的前21天每天服用一次（BID），这是其单药推荐剂量的25％。随后，PD-0325901根据经典的3 + 3设计进行了升级，具有固定的最大升级增量。剂量递增决策基于对所有可评估患者的安全性评估，在第一个治疗周期完成后进行。如果至少完成一个疗程的研究治疗，至少进行了安全性评估并且至少服用了两种药物，或者是否存在剂量限制毒性（DLT），则认为该患者可评估该研究的剂量决定部分发生在第一个周期。如果三分之二的患者经历了DLT，则在该剂量水平下接受治疗的患者数量将增加到最多六名。剂量不断增加，直到达到剂量水平，在治疗的前28天中，不超过六分之一的患者经历了DLT，前提是两种化合物的单药推荐剂量均未超过。患者正在继续研究治疗直至疾病进展。

　　在整个治疗过程中，通过身体检查，实验室评估，心电图检查，眼科评估和不良事件收集来监控安全性。不良事件是根据《不良事件通用术语标准》 4.0版记录的。与研究药物有关的所有可能，可能或确定的不良事件均被视为与研究/治疗有关。DLT定义为在第一个治疗周期内发生的不良事件或实验室异常，至少满足补充表S1中所述的一个标准。

　　在整个研究过程中，在基线以及每6周使用计算机断层扫描（CT）扫描进行放射肿瘤测量。修改协议后，频率更改为每8周一次。根据RECIST 1.1评估肿瘤反应。如果在开始研究治疗后至少进行了一次放射学评估，则可以评估8位患者的抗肿瘤活性。

　　药代动力学和药效学分析

　　对于药代动力学分析，在第一剂后第1天以及第1、2、3、4、6、8、12、24、72和144 h服药前，从所有患者中获取连续血样。在周期2的第1天，在给药前和给药后1、2、3、4、6、8、12和24 h抽取血样。使用经过验证的高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS / MS）测定血浆样品。简而言之，通过用乙腈/甲醇的混合物（1：1 v / v）进行蛋白质沉淀，从血浆中提取达科替尼和PD-0325901。使用Waters Xbridge BEH苯基色谱柱（50×2.1-mm内径，粒径为5μm）色谱分离化合物，并使用配备有涡轮离子喷雾接口的API4000串联质谱仪进行检测，并以阳离子模式运行。分别监测m/z480至329和m/z489至255，以分别检测达克替尼和PD-0325901。稳定的同位素标记内标用于定量。定量的下限和上限对于达科替尼分别为0.5和50 ng / ml，对PD-0325901为5和500 ng / ml。使用内部开发的用于非房室药代动力学分析的经过验证的脚本在R中计算药代动力学参数（版本3.6.0）。

　　在研究过程中，对方案进行了修改，以允许将肿瘤活检纳入药物动力学分析。在治疗前，治疗的第二周和治疗终止后进行活检。磷酸化（p）ERK和核糖体pS6（pS6-r）水平通过验证的免疫组织化学（IHC）染色方法进行评估，并采用半定量H评分（阳性细胞百分比（0-100）乘以染色强度（0-3） ）由一名独立的病理学家评估，该盲者对样品鉴定不知情。将肿瘤活检样品在福尔马林中固定16-24小时，然后包埋在石蜡中。

　　福尔马林固定石蜡包埋的肿瘤样品的免疫组织化学在BenchMark Ultra自动染色仪（Ventana Medical Systems）上进行。简而言之，将石蜡切片切成3μm，在75°C下加热28分钟，并在仪器中使用EZ制备溶液进行脱蜡（Ventana Medical Systems）。使用Cell Conditioning 1（CC1，Ventana Medical Systems）在95°C下分别对pS6-r和pERK1 / 2进行热诱导的抗原回收32和64分钟。使用克隆D68F8（1：1000稀释度，室温下32分钟，细胞信号转导）检测pS6-r，使用克隆D13.14.4E（1：400）检测磷酸化p44 / 42 MAPK（pERK1 / 2）（Thr202 / Tyr204）。稀释，室温下1小时，Cell Signaling）。

　　使用UltraView Universal DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测到pERK，而使用OptiView DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测pS6-r。将玻片用苏木精复染。使用Cell Conditioning 1（CC1，Ventana Medical Systems）在95°C下分别对pS6-r和pERK1 / 2进行热诱导的抗原回收32和64分钟。使用克隆D68F8（1：1000稀释度，室温下32分钟，细胞信号转导）检测pS6-r，使用克隆D13.14.4E（1：400）检测磷酸化p44 / 42 MAPK（pERK1 / 2）（Thr202 / Tyr204）。稀释，室温下1小时，Cell Signaling）。使用UltraView Universal DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测到pERK，而使用OptiView DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测pS6-r。将玻片用苏木精复染。使用Cell Conditioning 1（CC1，Ventana Medical Systems）在95°C下分别对pS6-r和pERK1 / 2进行热诱导的抗原回收32和64分钟。使用克隆D68F8（1：1000稀释度，室温下32分钟，细胞信号转导）检测pS6-r，使用克隆D13.14.4E（1：400）检测磷酸化p44 / 42 MAPK（pERK1 / 2）（Thr202 / Tyr204）。稀释，室温下1小时，Cell Signaling）。

　　使用UltraView Universal DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测到pERK，而使用OptiView DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测pS6-r。将玻片用苏木精复染。使用克隆D13.14.4E（1：400稀释，室温下1小时，Cell Signalling）在室温下32分钟，Cell Signalling）和磷酸化p44 / 42 MAPK（pERK1 / 2）（Thr202 / Tyr204）。使用UltraView Universal DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测到pERK，而使用OptiView DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测pS6-r。将玻片用苏木精复染。使用克隆D13.14.4E（1：400稀释，室温下1小时，Cell Signalling）在室温下32分钟，Cell Signalling）和磷酸化p44 / 42 MAPK（pERK1 / 2）（Thr202 / Tyr204）。使用UltraView Universal DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测到pERK，而使用OptiView DAB检测试剂盒（Ventana Medical Systems）检测pS6-r。将玻片用苏木精复染。如果您有需要购买劳拉替尼仿制药版，更多详情可咨询下方微信。