增强赛可瑞/克唑替尼抗肿瘤作用的方法

　　间变性淋巴瘤激酶阳性间变性大细胞淋巴瘤（ALK + ALCL）主要发生在儿童和年轻人中。他们的基于积极化学疗法的治疗并不是最佳的，因为ALCL患者仍然可以预期30％的2年复发率。肿瘤复发非常积极，其潜在机制尚不清楚。克唑替尼（赛可瑞）是最先进的ALK酪氨酸激酶抑制剂，已经在临床上用于治疗ALK相关的癌症。但是，出现了克唑替尼逃逸机制，从而阻止了其在前线ALCL治疗中的使用。自噬过程已被提议作为消除对酪氨酸激酶抑制剂耐药性的下一个目标。在这项研究中，我们调查了提交ALK灭活的ALCL细胞中是否具有自噬功能（使用克唑替尼或靶向ALK的siRNA）。

　　经典的自噬读数，例如通过电子显微镜进行的自噬体可视化/定量和LC3-B标记物翻转测定法，用于证明ALK灭活后自噬的诱导和通量活化。结合ALK和自噬抑制后，这证明对细胞活力和克隆形成测定具有细胞保护作用。总而言之，我们的结果表明，与克唑替尼和氯喹（两种已经在临床中使用的药物）共同治疗可能对ALK阳性的ALCL患者有益。结合ALK和自噬抑制后，这证明对细胞活力和克隆形成测定具有细胞保护作用。总而言之，我们的结果表明，与克唑替尼和氯喹（两种已经在临床中使用的药物）共同治疗可能对ALK阳性的ALCL患者有益。结合ALK和自噬抑制后，这证明对细胞活力和克隆形成测定具有细胞保护作用。总而言之，我们的结果表明，与克唑替尼和氯喹（两种已经在临床中使用的药物）共同治疗可能对ALK阳性的ALCL患者有益。

　　在这项研究中，我们证明了克唑替尼在ALK阳性ALCL细胞系中诱导自噬，这一结果在此特定的淋巴瘤亚群中从未见过报道。由于自噬抑制（通过药理抑制或通过siATG7介导的方法）可增强ALK灭活的抗肿瘤活性（通过克唑替尼治疗或通过siALK介导的方法），因此我们的结果表明自噬可作为生存机制在治疗方面受到挑战的ALK阳性ALCL细胞中。ALK先前已用自噬相连，在胶质母细胞瘤和耐克里唑替尼-NSCLC细胞系。然而，在这两项研究中，ALK酪氨酸激酶（胶质母细胞瘤中的全长ALK受体，NSCLC中的EML4-ALK融合癌蛋白）不是治疗的直接目标。在胶质母细胞瘤细胞系中，通过大麻素疗法（作用于大麻素受体）诱导自噬，在耐克唑替尼的NSCLC细胞中，高剂量（1至8μM）克唑替尼用于携带EML4-ALK丧失的细胞。因此，可以考虑在那些耐药的NSCLC细胞系中克唑替尼的另一个靶点。

　　因此，我们认为这项ALCL研究是第一个揭示药理学和分子NPM-ALK失活诱导自噬的研究。确实，我们的体外结果表明，自噬响应被安装并激活不久或者克唑替尼治疗（在血浆浓度相当于在患者所发现正在为ALK肿瘤处理后或在ALCL细胞中进行siRNA介导的特异性ALK抑制后。我们观察到支持ALK抑制后自噬反应的五个互补结果：1）AVO增加。2）通过电子显微镜确定的自噬体数量增加；3）LC3-II免疫组织化学染色增加，并重新定位于自噬体膜；4）自噬通量增加（ALK灭活和氯喹共处理后通过蛋白质印迹观察到LC3-II积累）；5）自噬基因表达增加。为了破译这种克唑替尼诱导的自噬是否影响细胞死亡或细胞存活功能，我们进行了几种测定，测试细胞活力，克隆形成存活，细胞凋亡以及ALCL细胞在体内形成异种移植肿瘤的能力。这些测定一起证明了ALCL中ALK失活后自噬的细胞保护作用。的确，我们发现：1）结合ALK和自噬药理学抑制作用（使用克唑替尼和氯喹或3-甲基腺嘌呤），这些药物对细胞活力的降低具有协同作用（而不仅仅是累加作用）；2）使用针对ATG7的siRNA进行的自噬分子失活本身并没有引起细胞活力的丧失，正如DA Gewirtz最近所强调的。值得注意的是，在ATG7下调后，仍然观察到自噬和ALK共抑制的增强作用。3）ALK灭活结合自噬抑制使细胞凋亡/坏死细胞死亡；4）克唑替尼和chloroquine的联合治疗大大降低了ALK阳性的Karpas-299克隆形成的存活率，明确证明自噬具有细胞保护功能，并损害了异种移植瘤的生长。

　　总而言之，这些结果强烈提示ALK和自噬抑制的组合可能有益于ALK依赖性ALCL的治疗，ALCL依赖的ALCL是一种从未被考虑过的治疗性组合。ALK阳性的ALCL患者目前正在接受积极的化疗（环磷酰胺，羟基阿霉素，癌蛋白和泼尼松（CHOP））治疗。克唑替尼用于ALK阳性ALCL的争议目前正在讨论中。最近对11名对细胞毒性治疗有耐药性/难治性的成年ALCL患者进行了使用克唑替尼作为单药治疗的临床研究。他们的结果表明，克唑替尼发挥了强大的抗肿瘤活性，并具有持久的反应和安全的良性特征，这鼓励克唑替尼在未来作为一线治疗药物的应用。然而，已经在复发的患者中鉴定了赋予对克唑替尼耐药的ALK突变。因此，根据我们的新数据，我们提出了克唑替尼诱导的自噬，通过其细胞保护功能，可以使某些细胞逃脱靶向疗法并在休眠状态下存活，如White和DiPaola所提出的，并在卵巢癌和胃肠道间质瘤（GIST）的模型。肿瘤细胞可以使用这种休眠状态来发展和获得对克唑替尼的抗性，从而使随后的肿瘤复发。

　　因此，与先前对伊马替尼治疗的CML或GIST的研究一致，表明自噬抑制可能代表一种增强对酪氨酸激酶抑制剂敏感性的新策略，我们目前的工作支持可以预防或抑制克唑替尼耐药和随后的ALCL肿瘤复发的概念。通过阻止自噬而减少。然而，在考虑ALCL患者治疗方案中的自噬抑制作用之前，需要进行进一步的临床和基础研究，以证明在克唑替尼治疗后人类肿瘤中确实发生了细胞保护性自噬，并更好地了解了克唑替尼如何以机械方式触发自噬诱导。并且，据报道被激活NPM-ALK下游。羟氯喹（或新的改进的自体吞噬抑制剂）的进一步研究也是必不可少的，以确定应当在患者被用于实现自噬抑制[剂量，频率和治疗持续时间。最后，除了依赖ALK的ALCL外，这项研究还应促使人们进一步研究调节自噬在其他ALK相关恶性肿瘤中的作用，这些恶性肿瘤可能包含不同的ALK融合蛋白或全长ALK癌基因的过度表达/活化。微信扫描下方二维码了解更多：