ALK结合与克唑替尼/赛可瑞在表达ALK的细胞中的敏感性研究

　　首先，我们询问在表达ALK的细胞中克唑替尼（赛可瑞）-ALK结合与克唑替尼敏感性之间是否存在相关性。为了回答这个问题，我们使用7种表达ALK的细胞系进行了CETSA，包括2种ALK阳性的间变性大细胞淋巴瘤（ALK+ALCL）细胞系（Karpas 299和SupM2），4种神经母细胞瘤细胞系（NB1，IMR32，GOTO和SK-N-SH）和一种非小细胞肺癌细胞系（H2228），并将这些结果与Crizotinib敏感性相关（即50％的抑制浓度，IC50）。

　　说明了这7种细胞系中ALK蛋白的表达及其磷酸化状态。在说明了来自4个神经母细胞瘤细胞系的结果的左图中，我们发现了代表全长ALK蛋白的220kDa条带和/或较低分子量（例如140kDa）的多个条带。这些发现与其他团体发表的发现一致。使用抗pALK的蛋白质印迹显示出与抗ALK基本上相似的模式。

　　在右侧面板中显示了三种携带ALK融合蛋白的细胞系的结果，我们发现ALK融合蛋白处于其预期分子量。具体而言，存在于SupM2和卡帕斯希299 NPM-ALK是位于约80kDa，而存在于H2228 EML4-ALK在约89 kDa的发现。SP53是套细胞淋巴瘤细胞系，用作ALK和pALK的阴性对照。

　　CETSA结果和IC50数据（从文献以及我们自己的研究中得出）总结于。对于本研究的目的，细胞系的IC50≤56纳米，包括两个ALK+ALCL细胞系和NB1，被认为克唑替尼敏感;其他4个细胞株的IC50> 56 nM的细胞被认为对克唑替尼有抗药性。在52°C时，通过Western blot检测到，与在DMSO处理组相比，在克唑替尼处理组中，ALZO明显多于DMSO处理组，则将克唑替尼-ALK结合评估为“阳性”。相比之下，如果在52°C下两组之间的ALK表达水平没有显着差异，则将克唑替尼-ALK结合评估为“阴性”。

　　使用Fisher精确检验进行的统计分析表明，这7种细胞系之间的克唑替尼敏感性和克唑替尼-ALK结合之间的相关性很显着（P = 0.029）。总体而言，这些结果表明，缺乏克唑替尼-ALK结合是表达ALK的癌细胞对克唑替尼耐药的主要因素。克唑替尼现在仿制药价格是多少？更多详情可咨询下方微信。