为了评估达克替尼（多泽润）和西妥昔单抗在头颈癌细胞系中阻断EGFR信号传导的程度并确定其阻断EGFR的有效性是否与其抑制生长的能力有关，我们进行了蛋白质印迹分析以评估关键蛋白的蛋白质水平和磷酸化状态EGFR信号通路中的分子。我们对代表对达克替尼治疗的差异反应的细胞系子集进行了蛋白质印迹分析。从最敏感的组（IC50 <10 nM）中选择四条品系，从中度组（1 uM> IC50> 10 nM）中选择三条品系，从抗性组中选择三株（IC50> 1 uM）。每组中所选细胞系的达莫替尼平均IC50 g值显示在。在EGF刺激的状态和未刺激的状态下，均用100 nM达克替尼或100 ug / mL西妥昔单抗处理细胞。评估了总的和磷酸化的EGFR（tEGFR和pEGFR）蛋白水平。
总EGFR水平与对达可替尼的敏感性有关；在所选的十个品系中，高敏感性组的四个品系中有三个品系的磷酸化和总EGFR含量最高，而三个耐药品系的总含量最低。中度组的细胞系具有中等水平的磷酸化和总EGFR。为了比较敏感组，中度组和耐药组之间的pEGFR水平，对蛋白质印迹图像进行了定量，并计算了每个敏感组的pEGR平均水平并进行了标准化。在高敏感性和中度组中，用这两种化合物治疗均能显着阻断EGF刺激的pEGFR的水平，但在耐药组中则无此作用。
两种药物的治疗均未降低总EGFR水平。但是，EGF刺激的对照组细胞中总EGFR明显减少。众所周知，EGFR在被EGF或其他配体刺激后会被内化并经常降解，这可以解释我们的观察结果。但是，加入这两种药物都不能消除这种作用，这增加了证据表明结合EGFR的化合物可能会抑制内在化和降解。
PI3K-AKT-mTOR和Ras-Raf-MAPK信号通路是EGFR信号的下游效应子。我们想评估达科替尼和西妥昔单抗在这些途径中的作用。首先，我们评估了用达可替尼或西妥昔单抗治疗后总AKT（tAKT）和磷酸化AKT（pAKT）的蛋白质水平。在对照条件下，pAKT和tAKT水平均与敏感性无关。EGF刺激显着增加所有细胞系中的pAKT。
在基线和EGF刺激的条件下，达克替尼降低了敏感和中度组的所有七个细胞系和耐药组（UMSCC-1）的一个细胞系的pAKT水平。达科替尼仅在EGF刺激的条件下能够降低耐药细胞系UMSCC-17B中的pAKT水平。在抗性细胞系（UMSCC-74A）中，在EGF刺激的条件下，pAKT水平略有降低。西妥昔单抗治疗在降低pAKT方面作用较小。西妥昔单抗治疗仅导致十个细胞系中的五个（2/4敏感系，3/3中度系和0/3耐药系）的pAKT降低，且降低的水平显着低于达莫替尼治疗所导致的降低，而不考虑EGF的刺激。
与EGFR一样，对Western印迹进行定量分析，确定并比较与tAKT标准化的pAKT组特异性水平。在没有EGF刺激的情况下，这两种化合物均显着降低了高敏感组而非中性或耐药组的pAKT水平。在EGF刺激的条件下，达科替尼能够降低所有三组的pAKT水平。在所有测试的情况下，达西替尼比西妥昔单抗引起的pAKT水平降低更大。
EGFR信号激活Ras会启动一个多步磷酸化级联反应，从而导致MAPK，ERK1和ERK2激活，并最终调节参与细胞增殖的基因的转录。在用达可替尼或西妥昔单抗治疗后，分析了总的和磷酸化的ERK（ERK1和2）蛋白（tERK和pERK）水平。在对照条件下，高敏感组的tERK和pERK蛋白水平较低，而耐药组的水平较高，而不考虑EGF刺激。任一种化合物的治疗均显着降低了高敏感性和中度组的7个细胞系中pERK的水平，而在基线状态下，耐药组的3个细胞系中只有1（UMSCC-1）。用EGF刺激后，pERK水平在所有细胞系中均显着增加。在这种情况下，敏感性和中度组的所有七个细胞系中的达可替尼仍能阻断ERK水平的磷酸化。在EGF刺激的条件下，除了降低耐药株UMSCC-1中的pERK水平外，达克替尼还降低了耐药株UMSCC-74A中的pERK水平。西妥昔单抗只能降低一种敏感性（SCC-9），一种中度（FaDu）和一种抗性（UMSCC-74A）细胞的pERK水平。在所有情况下，达克替尼导致的pERK水平降低幅度均大于西妥昔单抗。现在达克替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。
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