亿珂/依鲁替尼可有效预防小鼠慢性移植物抗宿主病

　　Bruton 的酪氨酸激酶 (BTK) 和 IL-2 诱导型 T 细胞激酶 (ITK) 是分别负责 B 细胞受体 (BCR) 信号传导和 T 细胞受体 (TCR) 信号传导通路中下游效应子磷酸化和激活的酶.依鲁替尼（亿珂）是 FDA 批准的 BTK 和 ITK 强效抑制剂，可损害 B 细胞和 T 细胞功能。CD4 T 细胞和 B 细胞对于慢性移植物抗宿主病 (cGVHD) 的诱导至关重要。我们通过测试依鲁替尼预防或改善 cGVHD 的能力来评估这些目标，cGVHD 是接受异基因造血干细胞移植 (allo-HSCT) 的患者的主要并发症之一。我们发现依鲁替尼在四种不同的小鼠模型中显着减轻了 cGVHD，伴随着长期存活率的增加和临床评分的降低。与载体对照相比，依鲁替尼治疗的受者的临床改善与血清自身抗体、共刺激分子激活、B 细胞增殖和肾小球肾炎降低有关。依鲁替尼还能够减轻急性 GVHD (aGVHD) 的临床表现，其中接受者接受有或没有 B 细胞的移植物，这表明依鲁替尼对 T 细胞的抑制作用有助于减少 aGVHD 和 cGVHD 发病机制。仍然缺乏有效的预防方案来降低同种异体造血干细胞移植后人类 cGVHD 的发生率和严重程度。我们的研究表明，依鲁替尼可有效预防多种 cGVHD 小鼠模型，且毒性最小，可能是临床上对抗人类 cGVHD 的一种有前景的策略。

　　已经表明 cGVHD 的发展与 ITK 和 BTK 的表达相关，因为接受缺乏功能性 BTK 的 ITK 或 X 连锁免疫缺陷 (XID) 脾细胞的受体在同种异体 BMT 后不会发生 cGVHD。然而，除了降低 B 细胞和 T 辅助细胞的活化外，在 aGVHD 和 cGVHD 的背景下，ITK 和 BTK 抑制下游的各种生物学机制尚未得到表征，也没有得到很好的理解。此外，除了 B 和 T 细胞，BTK 在造血谱系的其他细胞上也高度表达，例如树突细胞 (DC)、肥大细胞和巨噬细胞。小鼠肥大细胞上的遗传性 BTK 缺陷被证明会阻碍促炎细胞因子的产生，如 IL-12、TNF-α 和 IL-6，表明 BTK 参与 GVHD 的重要联系。

　　在这里，我们表明 BTK 和 ITK 都是治疗靶点，当被依鲁替尼（亿珂）抑制时，可以减少几种不同的 cGVHD 小鼠模型以及两种不同的 aGVHD 模型中 GVHD 的诱导或发病机制。伊布替尼的预防性给药可以提高两种反映 cGVHD 的小鼠模型的存活率，包括 DBA/2→BALB/c和 B6→BALB/c，并减少所有四种 cGVHD 测试模型的临床表现。

　　供体 B 细胞可以在淋巴器官的生发中心产生致病抗体，这是组织炎症和 cGVHD 发展所必需的。供体 B 细胞还可以作为抗原呈递细胞 (APC)，促进致病性 CD4+T 细胞的扩增。我们发现依鲁替尼（亿珂）能够显着减少增殖的供体 B 细胞的数量，以及 BMT 后血清 IgG 和 IgG2a 自身抗体的水平，表明依鲁替尼对 BTK 的抑制主要影响 B 细胞功能，这可以预防 cGVHD 或至少延迟疾病发作。据报道，CD40 和 CD86 共刺激分子都是抗原呈递所必需的，并在 cGVHD 发病机制中发挥关键作用，我们观察到供体 B 细胞上 CD40 和 CD86 表达显着降低，这可能是其中之一依鲁替尼在测试模型中对抗 cGVHD 的有效性机制。值得注意的是，当 B 细胞和 T 细胞都在移植物中时，我们没有观察到在 DBA/2→BALB/c 模型中依鲁替尼治疗后供体 T 细胞增殖的显着变化。这可能表明依鲁替尼对 BTK 信号的抑制作用超过了 ITK 信号，或者在 cGVHD 的发展下，T 细胞激活并不是绝对需要 ITK。另一方面，依鲁替尼使用两种不同的模型有效减轻受体 aGVHD 的临床表现，其中一种模型在系统中基本上不存在 B 细胞。表明依鲁替尼抑制 ITK 的治疗效果已被其他研究提出。此外，我们发现在aGVHD的 B6→BALB/c 模型中，与载体对照相比，依鲁替尼治疗的受者肝脏中 CD4+T 细胞的百分比显着降低。这种 T 细胞百分比的变化伴随着接受依鲁替尼治疗的接受者脾脏中 CD4+T 细胞群的显着增加，这表明这些 T 细胞的迁移状态发生了变化。我们还发现 CD4+和 CD8+与载体对照相比，用依鲁替尼处理的受体中的 T 细胞表达了显着更多的表面 β1 整合素。先前已经证明，脾表面 β1 整合素的下调与脾 α4β7 表达增加以及由此导致的 CD4+T 细胞归巢到肠道和淋巴集结的增加有关，以及 β1 整合素激活，这取决于ITK 激活，促进 T 细胞粘附到纤连蛋白。因此，我们的数据表明依鲁替尼（亿珂）可以影响 CD4+T 细胞迁移和/或粘附状态进入 GVHD 靶器官，例如肝脏，至少部分由 β1 整合素介导。通过依鲁替尼阻断 ITK 也可能影响供体 T 细胞的粘附特性，如依鲁替尼治疗后 β1 整合素表面表达增加所证明的临床中已经显示出类似的现象，其中几名 CLL 患者正在接受治疗由于整合素介导的无效血小板粘附，依鲁替尼显示血小板聚集减少 。

　　综上所述，我们证明了通过依鲁替尼（亿珂）预防性阻断 B 细胞上的 BTK 和 T 细胞上的 ITK，对于几种 cGVHD 小鼠模型和两种不同的 aGVHD 模型是一种有效的治疗策略。因此，我们的研究为在临床试验中使用依鲁替尼作为预防或减轻 cGVHD 的预防性治疗提供了基本原理。微信扫描下方二维码了解更多：