阿昔替尼(Axitinib)作为上皮性卵巢癌治疗剂的临床前评估

　　阿昔替尼（Axitinib）是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂，对各种实体瘤具有抗癌活性。我们研究了阿昔替尼在上皮性卵巢癌 (EOC) 中的抗癌作用。我们用阿昔替尼处理 EOC 细胞（A2780、HeyA8、RMG1 和 HeyA8-MDR）以评估其对细胞活力、凋亡和迁移的影响。进行蛋白质印迹以评估 VEGFR2、ERK 和 AKT 水平，以及 ELISA 和 FACS 以评估根据阿昔替尼治疗的细胞凋亡。此外，体内使用 A2780、RMG1 和 HeyA8-MDR 细胞系进行异种移植实验。我们用 EOC 的患者来源的异种移植模型 (PDX) 重复了实验。Axitinib 显着抑制细胞存活和迁移，并增加 EOC 细胞的凋亡。A2780、RMG1 和 HeyA8 中 VEGFR2 的表达和 AKT 和 ERK 的磷酸化随着阿昔替尼治疗以剂量依赖性方式降低，但在 HeyA8-MDR 中没有降低。在体内实验表明，与对照相比，阿昔替尼显着降低了药物敏感（A2780）和透明细胞癌（RMG1）异种移植模型以及铂敏感 EOC 的 PDX 模型中的肿瘤重量，但在耐药细胞系（HeyA8-MDR）中无效) 或重度预处理的耐火 PDX 模型。通过抑制与细胞增殖、凋亡和迁移相关的 VEGFR 信号，阿昔替尼在药物敏感或透明细胞 EOC 细胞中显示出显着的抗癌作用，但在耐药细胞中则没有。

　　上皮性卵巢癌 (EOC) 是最致命的妇科恶性肿瘤，也是女性癌症相关死亡的主要原因之一。EOC 的标准疗法包括最大程度的手术减瘤术和使用紫杉烷类和铂类化疗药物的辅助化疗。尽管之前对新型化疗方案和其他靶向治疗进行了研究，但临床结果或治愈率没有显着改善，目前 5 年总生存率为 45%。

　　阿昔替尼（Axitinib）是一种高度选择性的血管内皮生长因子受体 (VEGFR) 酪氨酸激酶 1、2 和 3 抑制剂，据报道具有通过抑制血管生成和淋巴管生成以及通过对肿瘤细胞的影响来控制肿瘤和转移的潜力通过细胞凋亡。临床研究在用于治疗各种实体瘤的 2 期试验中证明了有希望的抗癌活性。阿昔替尼在甲状腺癌、鼻咽癌患者中显示出单药活性，并提高了复发性胶质母细胞瘤患者的反应率。与索拉非尼相比，阿昔替尼还显着延长了持续性肾细胞癌 (RCC) 患者的 PFS 。联合免疫疗法加阿昔替尼治疗 RCC 产生了令人鼓舞的抗肿瘤活性。然而，尚未研究阿西替尼对 EOC 的影响。

　　阿昔替尼是一种高度选择性的 VEGFR 酪氨酸激酶抑制剂，被认为是治疗转移性肾细胞癌最有效的物质之一。在这项研究中，我们展示了阿昔替尼的抗血管生成和抗肿瘤活性，它有可能用于治疗 EOC。在体外研究表明，阿昔替尼以剂量依赖性方式显着抑制 EOC 细胞的增殖和迁移，并增加细胞凋亡。最初，细胞活力实验表明，阿昔替尼在所有 EOC 细胞中都显示出细胞毒活性。此外，在 EOC 细胞系中证实了阿昔替尼诱导的细胞凋亡。然而，在证实 EOC 细胞系中 VEGFR 表达及其下游信号传导的蛋白质印迹中，在 HeyA8-MDR 中未观察到阿昔替尼对 VEGFR2、AKT 磷酸化和 ERK 的抑制作用。与 A2780 和 HeyA8 不同，迁移试验显示阿昔替尼对 HeyA8-MDR 没有影响。基于这些结果，我们假设阿西替尼通过靶向包括血管生成、AKT 和 ERK 信号通路在内的多种通路来抑制 EOC 细胞。此外，进行侵袭相关MMP2/MMP9 ELISA以进一步解释细胞活力实验和细胞信号测定之间的差异，但在HeyA8-MDR和其他细胞系中未发现差异。这可能是由于肿瘤微环境的差异，但无法通过实验提出确切的机制。在原位小鼠模型中，观察到阿昔替尼对铂敏感细胞系和卵巢透明细胞系的肿瘤减少，但阿昔替尼对耐药细胞系的肿瘤无效。在 PDX 模型中观察到相同的结果。因此，在我们的实验中，我们得出结论，阿昔替尼作为单一药物的抗肿瘤作用仅在药物敏感的 EOC 模型中显着，但在耐药性 EOC 细胞系异种移植或 PDX 模型中不显着。

　　在我们的研究中，阿昔替尼在铂耐药组中的作用比铂敏感组弱。耐药性可以通过细胞内活性药物浓度、药物-靶标相互作用、靶标介导的细胞损伤、损伤诱导的凋亡信号传导或凋亡效应物的变化来解释，这可能会影响对阿昔替尼的反应。在之前的一项分析铂耐药细胞生物学特性的研究中，抗性细胞系表现出 DNA 铂化水平降低和受损 DNA 的更快修复，表明药物摄取、解毒和排泄以及 DNA 修复途径在抗性表型中起着核心作用。在目前的研究中，阿昔替尼在细胞活力测定和凋亡测定中对耐药细胞系（HeyA8-MDR）的治疗有效，但在细胞信号测定和体内治疗中无效具有耐药性异种移植模型的实验。我们还重试了蛋白质印迹，以确认 VEGFR 的表达及其对 HeyA8 和 HeyA8-MDR 的下游信号传导。在 HeyA8 细胞中阿昔替尼处理后 4 小时，磷酸化 VEGFR2 的表达、AKT 的磷酸化和 ERK 被抑制，但相反，在 HeyA8-MDR 中未观察到这种变化。为了解释细胞活力测试和细胞信号分析结果之间的差异，我们在 HeyA8 和 HeyA8-MDR 中进行了侵袭相关的 MMP2/9 ELISA。然而，未针对 HeyA8-MDR 测量 MMP2 的结果，如补充数据所示，阿昔替尼对 MMP2 的表达抑制显示 HeyA8 和 HeyA8-MDR 之间没有差异。不幸的是，这些额外的实验无法揭示明确的机制。这些差异可以用细胞系和组织之间的反应差异来解释。在癌症研究中，体外实验主要用于研究导致不受控制的细胞生长的基因调控和信号传导。进行体内实验以评估癌细胞与环境的相互作用，并产生更多信息结果，因为微环境是迁移策略和癌细胞侵袭效率的关键决定因素。

　　据我们所知，这是在 EOC 的临床前模型中首次评估阿昔替尼作为抗癌治疗剂的功效和机制。在这项研究中，我们证明了阿昔替尼在药物敏感的 EOC 细胞、异种移植物和 PDX 模型中与抗血管生成相关的显着抗肿瘤作用。微信扫描下方二维码了解更多：