从乳腺癌和宫颈癌细胞之前的报道，NHERF1被证明是能够影响多种抗癌药物[灵敏度。我们开始怀疑NHERF1的这种药理功能是否也可以在肺癌中，特别是在ALK阳性肺癌细胞中观察到。我们在H3122背景中使用了干扰siRNA的转染并准备了NHERF1敲低模型。与杂乱对照细胞相比，Western印迹显示NHERF1在转染细胞中的表达水平显着降低。通过测量转染的H3122细胞的细胞活力和凋亡率来测定对克唑替尼（crizotinib）的敏感性。在10μMcrizotinib处理后，观察到细胞凋亡被显着抑制通过流式细胞仪（从35％降至22％或19％）。通过敲低H3122细胞中的NHERF1表达，从克唑替尼剂量给药曲线观察到细胞存活率提高了。这些结果表明，敲低NHERF1可以降低ALK阳性细胞对克唑替尼的敏感性。
为了进一步检查ALK阳性细胞中的NHERF1敲低是否确实改变了ALK激酶活性从而改变了克唑替尼的敏感性，我们分析了ALK和相关信号分子的磷酸化。在NHERF1敲低的H3122细胞中，磷酸化ALK的水平显着增加用20％FBS刺激15分钟后，这是激活ALK的已知方法。此外，AKT和ERK的磷酸化也增加了。由于ERK和AKT都可能是ALK的下游蛋白来调节细胞的生长和增殖，因此我们评估了NHERF1敲低对生长的影响。分别转染两对siRNA后，观察到CCK8测定法分别增加了125％和150％。这些数据表明，NHERF1表达的减少导致H3122细胞中细胞生长的增加，这涉及ALK磷酸化的增加以及随后AKT和ERK下游信号激活的增强。这至少部分解释了先前在NHERF1的RNAi后发现的克唑替尼敏感性下降，其中伴随着ALK激活的增加预计需要增加药物剂量才能达到相同水平的凋亡诱导。
接下来，我们研究了与敲低情况相比，NHERF1在H3122细胞中的过度表达是否会产生反向的表型。将携带NHERF1表达盒的质粒转染到H3122细胞中，并通过Western印迹法评估蛋白质水平。与载体对照相比，在NHERF1转染的细胞中观察到了细胞生长至80％的轻度降低。然而，在NHERF1过表达下，对FBS诱导的ALK磷酸化以及相关的AKT和ERK活化的抑制作用似乎更为明显。结果表明，NHERF1过表达降低了ALK的激活以及相关的ERK或AKT信号传导。还暗示所产生的对细胞凋亡的抑制似乎比对细胞生长的抑制更为显着。
实际上，根据克唑替尼敏感性测定，在过表达NHERF1的细胞中，H3122细胞的凋亡从载体对照中的7％的基础水平增加到12％。当细胞暴露于10μMcrizotinib 24小时后，H3122细胞中NHERF1的异位过表达使细胞凋亡率从35％增至47％。此外，与空载体转染的对照细胞相比，在克唑替尼存在下，NHERF1的过表达显着降低了细胞存活率。这些结果证实了我们从先前实验中得到的发现，证明了NHERF1在ALK易位的肺腺癌癌细胞中的重要性。现在克唑替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。
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