赛可瑞/克唑替尼诱导肺癌细胞自噬

　　自噬是真核生物中进化上保守的生存途径，在化学疗法或靶向疗法后，癌细胞中的自噬经常被上调。因此，自噬的诱导已成为一种耐药机制。在这项研究中，我们发现克唑替尼（赛可瑞）通过抑制STAT3诱导肺癌细胞中高水平的自噬。野生型或组成型激活的STAT3的异位表达显着抑制了克唑替尼对自噬的影响。有趣的是，克唑替尼介导的STAT3抑制作用是逐步的。首先，它抑制细胞质STAT3，这导致EIF2A的磷酸化，然后抑制核STAT3，从而导致BCL-2的下调。在针对Beclin-1的药理抑制剂或shRNA抑制自噬后，克唑替尼诱导的细胞死亡大大增强。此外，自噬抑制剂HCQ在小鼠异种移植模型中显着增强了克唑替尼的抗肿瘤作用。总之，克唑替尼可通过抑制肺癌细胞中的STAT3来诱导细胞保护性自噬。因此，自噬抑制代表了改善克唑替尼治疗目标肺癌患者疗效的一种有前途的方法。

　　克唑替尼是MET，EML4-ALK和ROS1的多靶酪氨酸激酶抑制剂。它已被美国食品药品监督管理局批准为包含EML4-ALK融合蛋白的局部晚期或转移性NSCLC的初始治疗方法，也推荐用于MET患者放大。MET编码一个跨膜受体酪氨酸激酶，该激酶被肝细胞生长因子/散射因子（HGF / SF）激活。HGF与MET的结合导致受体激酶结构域的酪氨酸残基Tyr 1234和Tyr 1235的受体二聚化和转磷酸化；这启动了下游信号通路，包括RAS-ERK-MAPK级联，PI3K-AKT-MTOR通路和STAT3信号通路。这些信号转导途径，最终导致细胞增殖，存活和运动增加。的蛋白质的过表达或MET的基因扩增已牵涉各种癌症类型，特别是肺癌的肿瘤发生。早在一个相位数据我临床试验表明，克唑替尼在具有MET扩增的晚期NSCLC患者中具有强大的抗肿瘤活性。但是，克唑替尼的应用与其他靶向药物一样，不可避免地会获得后天的耐药性。电阻的可能的机制包括次级守门员突变以及信号途径旁路MET信号传导的激活。

　　我们测试了克唑替尼（赛可瑞）在一系列肺癌细胞系（包括SPC-A1，HCC827，H1975和A549）中的生长抑制特性，并发现尽管这些细胞系均未携带EML4-ALK融合蛋白，但大多数是对克唑替尼治疗有反应。在这4种细胞系中，SPC-A1对克唑替尼治疗最敏感，IC50约为2μM，而具有KRAS突变的A549细胞对克唑替尼最耐药，IC50超过4μM。具有EGFR突变的HCC827和H1975细胞表现出中等敏感性。然而，所有这些细胞系均表达MET。为了评估克唑替尼对自噬的影响，我们然后检查了克唑替尼治疗的肺癌细胞中自噬的发生。克唑替尼在SPC-A1，A549和H2228细胞中以剂量依赖的方式诱导LC3-II的脂化和p62的降解，这表明克唑替尼激活了自噬。

　　为了进一步证实该观察结果，通过间接免疫荧光染色监测了用克唑替尼处理的细胞中内源性LC3-II的区室化。在克唑替尼处理的细胞中观察到内源性LC3-II的特定点状分布。处理后，在SPC-A1和A549细胞系中，带有点状染色的FITC-LC3阳性细胞的百分比分别增加到75.4％和83.4％。带有点状染色的一部分LC3阳性细胞与溶酶体共定位，表明自身溶酶体的形成。此外，使用透射电子显微镜（TEM）验证了克唑替尼处理的细胞中自噬体的形成。克唑替尼处理的细胞表现出具有典型双层膜和细胞器残余物的大型自噬泡的积累，而在对照细胞中仅观察到少数泡。

　　总的来说，这些结果表明克唑替尼（赛可瑞）诱导肺癌细胞自噬。微信扫描下方二维码了解更多：