克唑替尼/赛可瑞抑制后STAT3通过IL10信号传导途径独立于NPM1-ALK激活

　　接下来，我们探讨了克唑替尼（赛可瑞）介导对ALK抑制的抗性的机制。致癌ALK融合激活了多个信号通路，其中STAT3代表关键的下游效应子。JAK / STAT信号传导的激活也高度依赖的细胞因子在淋巴样细胞，用IL-10是一个突出的活化剂。为了确定这是否也适用于ALCL，在ALCL细胞系中诱导了IL10RA的过表达；

　　在存在克唑替尼的情况下，它能够挽救STAT3的磷酸化。可以通过添加IL-10来增强这种效果。此外，添加了STAT3抑制剂Statticresensitized IL10RA过度表达细胞以克里唑替尼抑制。这表明IL10RA过表达可以独立于NPM1-ALK活性介导STAT3磷酸化，并且该机制可以成功逆转克唑替尼介导的对STAT3活性的抑制作用。

　　为了了解IL10RA过表达如何影响STAT3的转录靶标，我们检查了它们的表达水平。IL10RA的过度表达导致克唑替尼处理的细胞中已知STAT3靶基因（包括MYC / IRF4 / CD30）的mRNA水平升高。这些数据与CRISPR过表达筛选结果保持一致，其中sgRNA介导的MYC / IRF4过度表达可在存在克唑替尼的情况下实现细胞存活。

　　我们还观察到了公开提供的人源蛋白Atlas RNA-seq数据集之间IL-10RA和IL-10 mRNA表达水平之间的强相关性，而过表达IL10RA导致克唑替尼处理的细胞中IL-10 mRNA表达增加。此外，我们发现与患者1的ALKL1196M肿瘤（IL10RA较低）相比，患者2的ALK野生型肿瘤（IL10RA高）中IL-10的表达水平更高。这些结果表明，当IL10RA在ALK+ALCL中表达时，它可能通过激活STAT3产生自分泌正反馈回路而起作用。

　　为了研究STAT3是否可以直接调节IL10/IL10RA/IL10RB基因的转录，我们分析了来自两种用克唑替尼DMSO处理的ALCL细胞系的可用染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）数据，并将其与现有的STAT3 ChIP-seq进行了比较。来自小鼠CD4+T细胞的数据。我们在两种ALCL细胞系中都发现STAT3结合在IL10/IL10RA/IL10RB的转录起始位点（TSS）的上游，但不包括在幼稚的CD4+T细胞中。

　　令人惊讶的是，当克唑替尼抑制ALK活性时，STAT3结合被取消。此外，通过使用IRF4作为阳性对照，我们通过染色质免疫沉淀（ChIP）和qPCR验证了几个STAT3峰，并确认STAT3与SUP-M2细胞中IL10/IL10RA/IL10RB的TSS结合。与此相符的是，发现STAT3耗竭减少了表达靶向IL10RA的sgRNA的ALCL细胞系中IL-10mRNA的表达。此外，我们证实在存在克唑替尼的情况下，IL10RA的过表达可以拯救STAT3与IL10/IL10RB/IRF4的TSS的结合。因此，我们的数据支持了一个模型，其中IL10RA的表达增加促进IL-10配体的上调，最终逆转了克唑替尼介导的STAT3磷酸化抑制。这种机制可促进细胞存活并增强ALK+ALCL对ALK TKI治疗的抵抗力。现在克唑替尼的价格是多少？更多详情可咨询下方微信。