卡博替尼(Cabozantinib)与免疫细胞的协同作用

　　将CAR-T或CAR-NK细胞与化学治疗药物结合起来治疗实体瘤可能是一种有前途的策略。我们开发了一种表皮生长因子-（EGFR-）特异的第三代CAR。NK-92细胞通过慢病毒感染被CAR修饰。在体外证实了CAR修饰的NK-92细胞（CAR-NK-92）对肾细胞癌（RCC）细胞系的特异性杀伤能力。在体外和体内研究了卡博替尼和EGFR特异性CAR-NK-92细胞的协同作用。我们的结果表明，CAR-NK-92细胞以EGFR特异性方式裂解RCC细胞。与卡博替治疗可以增加EGFR和在RCC细胞减少PD-L1膜表面表达并增强CAR-NK-92细胞对抗RCC细胞的杀伤能力在体外。此外，CAR-NK-92细胞显示出与卡博替尼抗人RCC异种移植模型的协同治疗功效。我们的结果提供了与化学疗法相结合作为增强CAR修饰的免疫效应细胞治疗实体瘤疗效的新策略的基础。

　　卡博替尼（Cabozantinib）是一种TKI，已于2016年4月被FDA批准用于晚期RCC的治疗。已证明增加脾脏中CD8+和CD4+T细胞的频率，并减少包括MDSCs和Tregs在内的阴性调节细胞亚群的肿瘤浸润。最近，据报道卡博替尼通过在小鼠模型中触发中性粒细胞介导的抗癌先天免疫应答来根除晚期前列腺癌。此外，示出了卡博替尼协同响应时与免疫检查点封锁和癌症疫苗疗法通过在小鼠模型[消除MDSC在肿瘤微环境中组合。因此，卡波替尼可以以协同方式用于增强针对实体瘤的基于免疫的疗法的治疗功效。

　　在这项研究中，我们构建了针对野生型EGFR阳性癌症的第三代CAR，并试图在人类RCC小鼠模型中研究CAR修饰的NK-92细胞与卡博替尼组合的协同治疗功效。

　　为了检查卡博替尼的体外免疫调节作用，首先，我们通过细胞计数试剂盒8测定法确定了卡博替尼对肾癌细胞786-O和ACHN增殖的影响。786-O和ACHN细胞暴露于2.5 μ微克/毫升卡博替24,48，72，或96小时，以稳态血浆浓度达到在人体模型。卡博替尼在24、48、72和96小时后可显着降低786-O和ACHN细胞的增殖。然而，尽管有这种减少，但无论治疗如何，786-O和ACHN细胞在所有时间点都继续增殖。因此，我们将这一剂量的卡博替尼用于随后的所有体外研究。

　　先前已经表明，化疗可以改变肿瘤细胞的表型，使它们对NK细胞介导的杀伤更敏感。为了确定卡博替尼是否可以修饰影响EGFR特异性NK-92细胞效应功能的细胞表面标志物的表达，我们用卡博替尼处理了786-O细胞和ACHN细胞24小时，然后进行了染色和流式分析细胞计数。卡波替尼治疗增加了表达EGFR的786-O和ACHN细胞的百分比，这有助于EGFR特异性CAR-NK-92细胞的识别和刺激，尽管这种增加在ACHN细胞中没有统计学意义。卡博替尼还显着降低786-O和ACHN细胞中PD-L1的表达。这些标志物表达的改变可能使癌细胞更适合EGFR特异性CAR-NK-92细胞介导的杀伤。

　　为了确定卡博替尼治疗是否可以提高肾癌细胞对CAR-NK-92细胞介导的裂解的敏感性，我们将786-O和ACHN细胞处理了24小时，然后将它们用作LDH释放测定的靶标。卡博替尼治疗显着提高了786-O和ACHN细胞对EGFR特异性CAR-NK-92细胞的敏感性。综上所述，这些数据表明卡波替尼能够以使其更易于接受CAR-NK-92细胞介导的攻击的方式改变肾癌细胞，并且卡波替尼和CAR-NK-92细胞显示出协同协同的杀伤作用。

　　我们的结果表明，EGFR特异的CAR-NK-92细胞具有杀死RCC细胞的高潜力，卡博替尼治疗可以增加EGFR并降低RCC细胞中PD-L1膜表面的表达，卡博替尼可以增强CAR-NK的作用-92细胞体外和体内抵抗RCC的作用。当前的研究是基于NK-92细胞系的过继治疗。该方案的未来研究也可以扩展到自体或同种异体原代NK或T细胞。这项研究提供了一种新的策略来增强CAR修饰的免疫效应细胞对实体瘤的治疗效果。微信扫描下方二维码了解更多：