TAF+FTC NPs是根据我们先前报道的方法制备的，但有一些修改。简而言之，TAF+FTC NP是在无菌条件下使用水包油包水（w-o-w）乳液方法配制的。首先将含有50mgFTC的1mM HEPES缓冲液（pH9）中的主要或内部水相与含有1：1比例的PLGA和PF-127的有机相以及DCM中50mg / 100mg PLGA的TAF一起乳化并超声处理得到油包水型乳化液将上述w-o乳液进一步用含有1％PVA（作为稳定剂）的外部水相乳化，随后进行超声处理，产生最终的水包油包水型（w-o-w乳液）。将w-o-w乳液在通风橱中搅拌过夜，以蒸发有机相。
此外，使用透析膜，通过在无菌水-甲醇（比例为10：0.5）溶剂中进行透析，除去游离的未结合成分。将TAF+FTC NPs冻干并保存在4°C下直至使用。为了进行物理表征，将适量的冻干TAF + FTC NP分散在室温（RT）的超纯水中。使用ZetaPlus Zeta电位分析仪分析大小，多分散指数（PDI）和表面电荷。对五个不同批次的NP进行了一式三份的上述研究。通过高效液相色谱（HPLC）分析（Shimadzu，Kyoto，日本）评估了包封率（％EE）和载药量（％DL）百分比。简而言之，将TAF + FTC NP（1 mg）溶于DMSO（流动相中终浓度为40％DMSO），然后离心过滤；默克公司（德国达姆施塔特）。
TAF+FTC溶液（混合物中每种药物的浓度范围为500至0.48μg/ mL）遵循相似的程序，以生成标准曲线（r2 = 0.99）。根据HPLC分析确定的相应标准曲线估算1 mg TAF + FTC NP中的TAF和FTC负载浓度（方法：等度;流动相：25mM KH2PO4 45％：ACN 55％; TAF和FTC：吸光度分别在260和280 nm处，保留时间分别为4分钟和3.3分钟）。日内和日间波动率<15％。 ％EE（方程式1）和％DL（方程式2）通过以下公式估算：按照先前所述的方法，使用日立S-4700场发射SEM（纽约，NY，美国）上的扫描电子显微镜（SEM）成像评估TAF+FTC NP的形貌。对三批冷冻干燥的TAF+FTC NP（相同批次）在4°C下保存1年，评估了TAF+FTC NP的长期稳定性。按照用于新鲜冷冻干燥NP的相同方法，将1岁的冻干TAF + FTC NP（5 mg）溶于流动相1 mL 40％DMSO中。评估了尺寸，PDI，表面电荷，TAF：FTC比。将三批1岁的TAF+FTC NP的均值±平均值的标准误差（SE）与新鲜的批数据进行比较
为了评估TAF+FTC NP的内体药物释放曲线，将包含在TAF+FTC NP中的100μg/ mL的每种药物在模拟的内体溶液（即20 mM柠檬酸盐缓冲液，pH 5.5在37°C）下解离。短暂涡旋后，分别在各个时间收集100μL上清液。为了保持水槽状况，在每个时间点将收集的体积替换为新鲜的培养基。随后将收集的等分试样离心（20,817 x g在4°C下5分钟）以收集上清液。如上文在HPLC色谱法部分中所述进行HPLC分析之前，将所有上清液和标准品通过旋转过滤器单元过滤。
如先前出版物[18]所述，对3批TAF+FTC NP分别计算了TAF和FTC在各个时间点的平均累积释放百分比。为了评估体外细胞毒性，TZM-bl细胞系和CellTiter-Glo如先前所述，使用了发光测定法。简而言之，分别以不同浓度（20、10、1、0.1、0.01μg/ mL）用TAF+FTCNP或TAF+FTC溶液一式三份地将104个细胞/孔的TZM-bl细胞处理96小时。阳性和阴性对照分别包括5％DMSO和1xPBS处理的细胞（一式三份）。为了确定细胞毒性，使用了CellTiter-Glo®发光细胞活力测定试剂盒（Promega，麦迪逊，威斯康星州，美国），并遵循制造商的规程。使用具有Gen软件的Synergy II多模式读取器读取样品的发光。细胞毒性百分比基于相对于未治疗的阴性对照组的标准化生存力百分比。使用三个独立的NP批次进行了实验。那么现在taf哪能买到？价格是多少？更多详情可咨询下方微信。
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