引入厄洛替尼Erlotinib治疗后成纤维细胞系中转录组的变化

　　已证明靶向EGFR的疗法对过度表达EGFR的肿瘤（例如NSCLC）患者具有临床有效性，但EGFRTKI疗法通常会导致疼痛的丘疹脓疱性皮疹，这可能会限制长期治疗。我们进行了这项微阵列研究，以进一步了解引入厄洛替尼治疗后成纤维细胞系中转录组的变化，并确定与EGFRTKI相关皮疹机械相关的潜在基因以供进一步研究。在我们选择用于验证的八个基因中，我们能够通过蛋白质印迹分析和qPCR确认四个基因（MMP12、CCL2、CDC6和SLC7A11）。　　

　　在这个实验中使用微阵列技术的优势是有机会在用厄洛替尼处理的真皮成纤维细胞中观察人类基因组中几乎所有基因表达的同时变化，对比联合对照（载体或不治疗）。然而，微阵列缺乏特异性，因为只能检查阵列上的基因。因此，我们感兴趣的基因可能存在不同的亚型，但在阵列上没有检测到。此外，杂交的背景水平（无论表达水平如何与探针杂交的基因）也限制了微阵列分析的准确性，尤其是对于低丰度的基因。鉴于此，我们无法验证也就不足为奇了AQP3和PARLD;尽管如此，我们的结果为在经历EGFRTKI诱导的皮疹的癌症患者中进一步研究这些基因提供了基础。

　　我们选择了几个基因进行进一步研究，因为它们在伤口愈合、皮疹发展或成纤维细胞活化中的潜在作用，但这些基因在我们的数据集中没有高度表达。CCL2已被证明在人类皮肤和不同小鼠模型中显着上调，表明EGFRTKI在皮肤中具有抗炎作用。在我们的微阵列研究中，在成纤维细胞系上用1μM厄洛替尼治疗导致CCL2下调，但在新实验中用qPCR证实时上调，这与所描述的研究一致。鉴于在所有皮肤细胞类型中都发现了免疫反应性，但在角质形成细胞中更为突出，CCL2在真皮成纤维细胞中的含量可能较低是合理的。在检查蛋白质的潜在关联时，String分析显示CCL2和CDC6之间存在某种关联，CDC6作为DNA复制早期步骤的调节器。CDC6与NSCLC的鳞状亚型有关并且与NSCLC患者的总体、无复发和无病生存期相关，与治疗和疾病分期无关。基因之间的关系及其与EGFRTKI诱导的皮疹的相互作用仍然是一个探索领域。　　

　　我们选择验证两个基因，MMP12和SLC7A11，因为它们在癌症和癌症进展中的作用。MMP12是一种蛋白质编码基因，参与正常生理过程（如组织重塑）中细胞外基质的分解，已被证明在肿瘤侵袭和转移中具有重要作用。虽然我们没有发现专门研究MMP12和EGFR-TKI皮疹的已发表研究，但MMP12已在肝样皮炎(DH)患者中进行了检查，并由自发性和诱发性DH皮疹的上皮下巨噬细胞表达，并且可能是未来探索EGFRTKI诱导的皮疹的目标。　　

　　我们的结果应该考虑几个限制来解释。首先，我们使用一种用一种EGFRTKI处理的人类成纤维细胞系，然后评估基因表达的变化；因此，我们实验中的细胞应该具有相似的行为并且具有相同的变化率。我们无法将我们的结果推广到其他细胞系（例如，突变EGFR细胞系、肺癌细胞系（如HOP-62）或源自人类皮肤活检组织的原代细胞，这些组织包含真皮细胞类型和不同变化率细胞的混合物。尽管如此，我们的研究结果为进一步评估EGFRTKI诱导的皮疹在有或没有癌症、有无皮疹的患者中提供了基础，以了解EGFR的抑制如何改变从皮肤活检培养的成纤维细胞中的转录组，考虑混杂变量，例如作为先前的癌症治疗和EGFR突变状态。　　

　　鉴于EGFR的上调与癌症相关过程有关，例如抑制细胞凋亡和不受控制的细胞增殖，假设存在直接途径，则EGFR的抑制应导致这些过程的下调过程。虽然我们的结果与这一假设一致，但在我们的研究中用厄洛替尼或载体治疗并不影响通过MTT测量的细胞活力。因为MTT的量(a)与MTT暴露期间活细胞而不是凋亡细胞的数量成正比;(b)可能因不同细胞类型而异；(c)可能随着细胞培养的持续时间而变化，我们实验中的成纤维细胞可能已经处于凋亡过程中，因此不能用MTT表示。　　

　　最后，第一代（如厄洛替尼Erlotinib）和第二代（如阿法替尼）EGFRTKI靶向野生型EGFR，但第三代EGFRTKI，如奥希替尼和罗塞利替尼，不使用野生型EGFR，从而减少皮疹和更好的抗癌活性。然而，新的EGFRTKI还报告了其他有问题的副作用（例如，高血糖、QTc延长），并且患者由于C797S突变而对第三代EGFRTKI产生耐药性。未来的研究应该比较不同代和不同类型EGFRTKI之间基因表达的变化。详情请扫码咨询：