克唑替尼(Crizotinib)是如何抑制胰腺癌的

　　克唑替尼（Crizotinib）是一种 c-MET/ALK 抑制剂，已在不同类型的癌症中表现出抗肿瘤功效。然而，关于克唑替尼在胰腺癌中的研究是有限的。因此，我们研究了克唑替尼对胰腺癌的影响及其作用机制。克唑替尼以剂量依赖性方式强烈抑制胰腺癌细胞的生长和增殖。此外，它通过调节其相关因子来诱导细胞凋亡。研究中，关于作用机制，克唑替尼不抑制胰腺癌细胞上c-MET的表达；相反，它特异性地抑制了 ALK 的活性，在我们的研究中，ALK 被确定在各种胰腺癌细胞和组织中高度表达。在 42 种不同的受体酪氨酸激酶 (RTK) 阵列中，克唑替尼还强烈抑制胰腺癌细胞中活化 ALK 的表达，调节其下游介质，如 STAT3、AKT 和 ERK。此外，克唑替尼在小鼠基质胶栓塞试验中抑制血管生成以及在小鼠异种移植模型中抑制肿瘤生长的进展。总之，我们的研究表明，克唑替尼抑制胰腺癌中的 ALK 信号通路，导致细胞生长/血管生成抑制和细胞凋亡诱导。我们建议克唑替尼可用作治疗胰腺癌的新型治疗药物。我们的研究表明，克唑替尼抑制胰腺癌中的 ALK 信号通路，导致细胞生长/血管生成抑制和细胞凋亡诱导。我们建议克唑替尼可用作治疗胰腺癌的新型治疗药物。我们的研究表明，克唑替尼抑制胰腺癌中的 ALK 信号通路，导致细胞生长/血管生成抑制和细胞凋亡诱导。我们建议克唑替尼可用作治疗胰腺癌的新型治疗药物。

　　晚期胰腺癌是美国癌症相关死亡的第四大原因。尽管已经为治疗胰腺癌做出了广泛的努力，但其侵袭性行为和对大多数化疗药物的内在抵抗导致不到 5% 的总体 5 年生存率 。只有一小部分选定的患者能够接受外科手术。迄今为止，有几种方案被广泛用于治疗晚期胰腺癌，包括单独使用吉西他滨或与其他药物联合使用；然而，令人失望的是没有明确局部晚期胰腺癌的治疗选择。

　　间充质上皮转化因子 (c-MET) 是肝细胞生长因子 (HGF) 受体酪氨酸激酶 (RTK) 的亚家族之一，其功能是介导细胞增殖、侵袭、运动和存活。在胚胎发生和组织修复过程中，c-MET 信号传导对正常过程至关重要。据报道，c-MET在多种人类癌症中高表达，如肝癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、胃癌和胰腺癌。此外，c-MET 在许多癌症中经常过度表达、突变或扩增。在胰腺癌，c-Met的过表达最多的胰腺导管腺癌病例的80％，和c-MET的改变被证明是增加的复发率和总体较差存活率胰腺导管腺癌患者。最近，c-MET 已被确定为胰腺干细胞的新标志物和胰腺癌的治疗靶点。此外，c-MET 抑制剂，如卡博替尼，已经克服了胰腺癌细胞中的吉西他滨耐药性。

　　间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 是 RTKs 的胰岛素受体超家族之一，它最初是在间变性大细胞淋巴瘤中克隆核蛋白核磷蛋白 (NPM)-ALK 融合基因的结果。ALK 通路是各种人类癌症中最常见的失调通路之一 。ALK 的激活通过调节信号通路（如 PI3K/AKT、STAT3 和 RAS/MEK）介导许多功能过程，包括细胞增殖、存活、分裂和侵袭。据报道，ALK 易位是许多癌症中基因组 ALK 畸变的最常见原因，包括间变性大细胞淋巴瘤、非小细胞肺癌、弥漫性大 B 细胞淋巴瘤和炎性肌纤维母细胞瘤。此外，ALK 在许多癌症中也经常发生突变或扩增。出于这个原因，靶向 ALK 信号已成为许多类型的 ALK 改变癌症的有吸引力的治疗方法。

　　克唑替尼（Crizotinib）是一种 ATP 竞争性小分子和口服生物可利用的 c-MET/HGF 受体和 ALK 酪氨酸激酶双重抑制剂。在早期研究中，克唑替尼抑制了肿瘤细胞增殖和微血管密度，还诱导了多种癌症的细胞凋亡，包括胃癌、非小细胞肺癌和卵巢癌。在临床试验中，克唑替尼于 2011 年被美国食品和药物管理局 (FDA) 批准用于治疗局部晚期或转移性 ALK 重排非小细胞肺癌。 该批准取决于 50 - 61% 的反应率255 ALK重排的非小细胞肺癌患者参加两个单臂试验。

　　虽然克唑替尼的生理和抗癌作用在许多癌症中都有记载，但克唑替尼在胰腺癌中的抗癌活性尚未得到充分研究。因此，我们研究了克唑替尼的抗癌作用及其在胰腺癌中的作用机制。我们目前的研究表明，在胰腺癌中，克唑替尼通过抑制 ALK 信号而不是 c-MET 信号来诱导细胞凋亡并抑制细胞生长或血管生成。

　　克唑替尼抑制胰腺癌细胞的细胞生长和增殖

　　为了评估克唑替尼对胰腺癌细胞（AsPC-1、PANC-1 和 MIA PaCa-2）生长和增殖的影响，我们使用 MTT 测定和 BrdU 染色。MTT 测定的结果显示，克唑替尼以剂量依赖性方式抑制胰腺癌细胞的生长 48 小时和 72 小时，在胰腺细胞系中IC50值接近 5 μM。。使用 BrdU 染色 6 小时，我们还发现克唑替尼以剂量依赖性方式抑制 PANC-1 细胞的增殖。

　　克唑替尼诱导胰腺癌细胞凋亡

　　为了进一步了解克唑替尼是否诱导胰腺癌细胞凋亡，我们在 PANC-1 细胞中进行了 TUNEL 测定、JC-1 染色、MitoTracker 探针和蛋白质印迹。通过 TUNEL 染色观察到，在克唑替尼处理后检测到 DNA 片段。在细胞凋亡过程中，线粒体发生了几个关键事件，包括细胞色素c的释放、电子传递的变化和线粒体跨膜电位的丧失。

　　克唑替尼不抑制胰腺癌细胞中 c-MET 的磷酸化

　　据报道，c-MET在多种癌症中高表达，包括肺癌、乳腺癌、结肠癌和胰腺癌。c-MET 抑制剂，包括克唑替尼和卡博替尼，增强了吉西他滨在胰腺癌中的抗肿瘤作用。此外，作为 c-MET 抑制剂的克唑替尼通过抑制肺癌和胃癌细胞中的 c-MET 信号传导显示出抗肿瘤作用。因此，我们确定了 c-MET 在胰腺癌中的表达，然后研究了克唑替尼是否抑制了胰腺癌细胞中 c-MET 的磷酸化。

　　克唑替尼抑制 c-MET 扩增细胞中 c-MET 的磷酸化，而不是在 c-MET 过表达或剪接突变细胞中

　　一些报告表明，克唑替尼通过抑制 c-MET 改变癌症中的 c-MET 信号传导来抑制增殖和生长。然而，在这项研究中，克唑替尼没有抑制胰腺癌细胞中 c-MET 的磷酸化。为了进一步推测原因，我们使用了三种类型的 c-MET 改变的癌细胞系，包括 SNU-5、MKN-45 和 SNU-638 胃癌细胞（c-MET 扩增）、NCI-H596 非小细胞肺癌（c-MET 剪接突变）和 HT-29 结肠癌细胞（c-MET 过表达）。根据结果，克唑替尼仅在 c-MET 扩增癌细胞中抑制 c-MET 的磷酸化，而在其他类型的 c-MET 交替癌细胞中没有抑制。

　　微信扫描下方二维码了解更多：