阐明达克替尼Dacomitinib诱导的皮肤毒性机制

　　我们之前生成了一种针对afatinib的特异性抗体，它可以识别除4-(二甲基氨基)-2-丁烯部分之外的结构。阿法替尼的结构与达克替尼非常相似。抗法替尼血清显示约15%的交叉反应性达克替尼。提示抗法替尼血清可用于分析达克替尼。因此，抗法替尼血清作为抗达克替尼血清用于达克替尼的免疫组化。　　

　　达克替尼和法替尼的结构包括α，β-不饱和酮部分(4-[二甲氨基]-2-丁酰胺部分)，可作为Michael反应的受体分子。这些药物的α，β-不饱和酮部分与蛋白质的富电子部分(如巯基或氨基)形成共价键。因此，这些药物通过与EGFR或其他蛋白形成共价键定位于组织中。达克替尼和阿法替尼都是通过与ErbB家族受体共价结合作用的TKIs；因此，我们预测达克替尼和阿法替尼在肠道和皮肤的定位是相似的。然而，达克替尼在肠道和皮肤中的定位还没有被揭示。因此，利用阿法替尼血清对达克替尼进行免疫组化，明确了达克替尼在大鼠肠道和皮肤中的定位和蓄积。　　

　　单次口服达克替尼24或72小时后，对大鼠小肠(十二指肠、空肠、回肠和结肠)和皮肤进行免疫染色。dacomitinib单剂量口服后,强大的染色观察24小时后回肠和结肠,只有轻微染色在十二指肠和空肠回肠,几乎整个组织染色,在结肠上皮细胞和肌肉层的奥尔巴赫丛专门染色。为了验证免疫染色过程的特异性，我们进行了两次不同的阴性对照实验，结果均为阴性。这些阴性对照实验表明达克替尼的免疫染色具有特异性。这些结果也表明达克替尼特异性定位于肠的回肠和结肠。　　

　　ErbB-1、-2、-4在回肠的表达高于肠道其他区域的。Qu等报道，表调节蛋白的表达仅限于结肠的上皮细胞。这些结果表明，肠内免疫染色的强度与肠内ErbB家族的表达成正比。此外，这些染色结果与阿法替尼在肠道中的染色结果几乎相同。达克替尼可引起严重的回肠损伤，并伴有大鼠MCP1表达和胃肠道通透性增加，回肠的组织学改变最明显。这些结果和我们在回肠的免疫染色结果强烈提示达克替尼导致回肠损伤。此外，给药后回肠和结肠中仍有大量的达克替尼残留达72小时。这一结果表明，停药后达克替尼在回肠和结肠中的毒性可能会持续很长时间。　　

　　为阐明达克替尼诱导的皮肤毒性机制，对单次口服达克替尼24或72小时后收集的大鼠皮肤切片进行免疫染色。表皮、皮脂腺和毛囊染色也很清楚。真皮成纤维细胞染色呈中度阳性。此外，显著数量的达克替尼在给药后皮肤中持续72小时。进行了两种不同的阴性对照实验，均给出了阴性结果。这些染色结果与阿法替尼在皮肤黑血bb0中的染色结果几乎相同。大鼠皮肤中的表皮生长因子受体已经在表皮、皮脂腺和毛囊基底膜上的上皮细胞上检测到。染色强烈的部位与EGFR表达的部位几乎完全一致。这些结果强烈表明，达克替尼诱导的皮肤毒性是通过抑制皮肤中的egfr而发生的，并且可能在停药后持续很长时间。　　

　　总之，我们成功地开发了使用抗阿法替尼血清检测达克替尼的免疫组化方案。达克替尼免疫组化可能是一个有用的工具，使检测定位和积累的达克替尼- erbb家族受体缀合物。通过观察达克替尼- erbb家族受体偶联物的定位和积累，有望为研究达克替尼的作用和毒性提供重要数据。本报告首次阐明了达克替尼在大鼠肠道和皮肤中的定位和积累，有助于阐明达克替尼（Dacomitinib）引起腹泻或皮肤毒性的机制。详情请扫码咨询：