TAF调节组蛋白H1的量在ISG启动上

　　与对照组细胞相比，组蛋白H1KD细胞中的ISGmRNA水平升高，就像TAFKD细胞中的ISGmRNA水平升高一样。我们还观察到在用针对组蛋白H1.2的siRNA转染siRNA的组蛋白H1 KD细胞中具有相同的作用，其靶向组蛋白H1.2的区域不同于图中用于分析的siRNA表达载体的区域。这些结果表明，组蛋白H1作为ISG转录的负调节剂，与TAFKD细胞ISG启动子上组蛋白H1的减少量有很好的相关性。

　　我们检查了TAF和组蛋白H1的双重KD对ISG转录的影响。在TAF和组蛋白H1KD细胞中，ISGmRNA水平升高，但在双KD细胞中未观察到累加作用，表明TAF和组蛋白H1在ISG转录过程中可能以同一途径起作用。为了确定ISG启动子上组蛋白H1的水平是否影响TAF的染色质结合，我们测量了组蛋白H1KD细胞中ISG启动子上的TAF的量。在组蛋白H1siRNA转染的细胞的ISG启动子上，组蛋白H1的量显着减少，而在组蛋白H1KD和对照细胞中TAF的量没有变化。这些结果表明ISG启动子上的组蛋白H1不会影响TAF的染色质结合。

　　根据以上结果，可以合理地推测TAF调节组蛋白H1的量在ISG启动上，组蛋白H1在转录沉默状态和IFN刺激诱导的ISG转录早期受到负性控制，组蛋白H1在几个启动子区域的染色质结构形成中起作用。为了检查TAF和组蛋白H1是否参与调节ISG启动子附近的染色质结构，我们进行了MNase保护试验，以监测TAFKD和组蛋白H1KD细胞中染色质的紧密度。在所有情况下，总的DNA消化模式（核小体重复长度）似乎都相似，这表明TAF-1和组蛋白H1.2的KD或IFN处理不会影响全基因组的核小体结构。因此，在此实验条件下，组蛋白H1.2的耗竭水平可能不足以引起先前报告中报道的全基因组核小体重复长度的显着变化，并且组蛋白的定位可能通过TAF进行的H1并非全基因组机制，而是在某些基因的染色质。然后，我们使用覆盖ISG启动子区域的引物进行qRT-PCR，以确定对的MNase消化。与处于转录沉默状态和干扰素刺激诱导的转录早期的对照细胞相比，TAF和组蛋白H1KD细胞中MNase消化产生的残留基因组DNA数量显着减少。

　　这些结果表明，TAF将组蛋白H1募集到ISG启动子上，并因此在ISG启动子区域附近维持相对紧密的染色质结构，以防止转录机制的加载和/或Pol II的转录。在IAS转录中TAF的研究中，我们研究了TAF与ISG启动子的关系.TAF在转录沉默状态下与ISG启动子相关，并在IFN刺激下逐渐释放TAF的减少很有可能导致ISG启动子区域中组蛋白H1的减少以IFN依赖性的方式发生。先前的研究表明，TAF倾向于与未乙酰化和低乙酰化的蛋白相互作用，但与高乙酰化的组蛋白不相互作用。我们显示，在IFN处理的细胞中，ISG启动子处的乙酰化组蛋白水平升高。基于这些结果，我们假设通过IFN处理诱导的乙酰化组蛋白将限制TAF与ISG启动子的结合。

　　为了验证这一假设，我们使用了从用HDAC抑制剂TSA处理的HeLaS3细胞制备的染色质进行的ChIP分析，以在ISG启动子上维持高水平的组蛋白乙酰化。 TSA处理的细胞中ISG15启动子上的组蛋白H1的量低于模拟处理的细胞，在这些条件下，我们还测量了与ISG启动子结合的TAF的量，使用与图6A6A相同的方法制备的细胞，然后进行TSA处理，TAF的水平与ISG舞膜结合。现在taf哪能买到？价格是多少？需要的话可以添加下方的微信二维码。