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TAF凋亡阳性对照溶液中现象观察

时间:2020-09-17 13:33 来源:www.kangantu.com 作者:康安途海外就医

  TAF凋亡阳性对照溶液中现象观察?如先前报道的进行慢病毒载体的构建。简而言之,上海基因化学有限公司构建了针对人类TAF-Iβ基因的短发夹RNA(shRNA)和作为阴性对照。然后使用Lipofectamine®2000用shRNA-KD或shRNA-NC载体转染白血病细胞。在荧光显微镜下对绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞进行计数。通过逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹分析评估RNA干扰效率。

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  使用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定法分析细胞增殖,其根据制造商的方案进行。将总共100μl的细胞悬液(5,000个细胞/孔)插入96孔板中,并将细胞在37℃在5%CO 2中培养48小时。培养后,将10 μl CCK-8溶液加到平板的每个孔中,并将细胞在37°C的培养箱中培养3小时。随后,使用多功能酶标仪在450 nm处测量吸光度。TAF凋亡阳性对照溶液中现象观察?taf哪能买到

  每组细胞用预冷的PBS洗涤3次,然后根据制造商提供的细胞周期染色方案和Annexin V-藻红蛋白/ 7-氨基放线菌素D细胞凋亡试剂盒(多科学,杭州)分析细胞周期和凋亡,分别使用BD FACScan流式细胞仪。为了进行细胞周期分析,将约1×106个细胞与1 ml DNA染色溶液和10 μl通透溶液一起孵育。将细胞涡旋10秒,并在黑暗中于室温温育30分钟并进行分析。

  TAF凋亡阳性对照溶液中现象观察?为了检测凋亡细胞,将3×106个未处理的细胞重悬于500μl凋亡阳性对照溶液中。在冰上孵育30分钟后,弃去上清液。随后,加入1.5ml 1X结合缓冲液。将该细胞悬浮液分为三组,分别标记为空白对照组,单次染色A(5μlAnnexin-荧光素异硫氰酸荧光素染色5分钟,无光照)和单次染色B(10μl碘化丙啶染色,无光照5分钟)。随后,设置用于FCM的参数用于分析上述细胞群。由于这六个白血病细胞系都接受了相同的处理。没有单独设置每个细胞系的流量参数。尽管这可能会导致某些细胞系具有较高的背景状态,但不会导致最终的统计结果发生质的变化。基于这些标准,执行了所有其他分析。

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(责任编辑:康安途海外就医)

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