帕博西尼/爱博新对于细胞周期蛋白依赖性

　　主要终点是在C1D15时使用帕博西尼（也叫做爱博新）加阿那曲唑的CCCA（Ki67≤2.7％）。该研究旨在确保PIK3CA WT队列的样本量以及主要终点分析的总体人群。根据弗莱明的II期单阶段设计，在PIK3CA WT队列中选择了33名样本，以检验以下假设：帕博西尼加阿那曲唑与单独的阿那曲唑相比，CCCA率提高至少50％（44％的阿那曲唑基于历史数据，相比之下，使用帕博西尼加阿那曲唑治疗时为66％，功效= 0.8，α= 0.05）。如果超过20/33的患者达到了CCCA，则达到主要终点。根据CLIA PIK3CA测序，将患者前瞻性地分配给C1D1的PIK3CA WT或Mut Cohort。根据PIK3CA突变的患病率，我们估计14-17名患者将参加探索性PIK3CA Mut队列，而33名患者将参加PIK3CA WT队列。如果在PIK3CA Mut队列中有15个中的10个获得CCCA，则“真实”率的80％置信度将为47％-83％。

　　符合条件的患者进行了预注册，并进行了基线肿瘤活检（C0D1），如果绝经前已开始PIK3CA测序，则开始0周期阿那曲唑（每天1mg PO，连续4周）和戈舍瑞林（每28天3.6mg SC）。在肿瘤活检（第二次活检时间点）并登记到PIK3CA WT或Mut Cohort之后，在C1D1上开始帕博西尼。由于DNA质量或数量不足（QNS）而导致PIK3CA测序失败的患者，也按照方案接受治疗。

　　再次在C1D15（第三个活检时间点）上进行肿瘤活检，以进行CLIA Ki67分析。如果C1D15 Ki67> 10％，则由于反应不足而终止方案治疗。 C1D15Ki67≤10％（或不确定）的患者继续接受帕博西尼和阿那曲唑治疗4个周期，除非患者在接受戈舍瑞林治疗或停药后经历了无法忍受的副作用，疾病进展，绝经前雌二醇水平。最后一次使用帕博西尼后3-5周进行手术，以恢复不良事件（AE）。方案修订后，在第4周期完成后3周内ANC恢复至> 1.5k / mcL，血小板> 100k / mcL且非血液学AEs≤1级的患者在第5周期立即接受了额外的10-12天帕博西尼手术。给予阿那曲唑（如果绝经前使用戈舍瑞林）直至手术。

　　在每个周期的第1天进行临床胶带/卡尺二维肿瘤测量和CTCAE 4.0的AE评估。在C1D1和C3D1上测试血清雌二醇水平。在基线和手术前需要通过乳房X线照片和超声检查进行放射学评估。通过WHO标准评估临床肿瘤反应，并通过RECIST 1.1评估放射学反应。对外显子2、5、8、10和21进行PIK3CA测序，并对来自基线活检的肿瘤DNA进行外显子-内含子剪接首先是Sanger（n=18）在CLIA认证的华盛顿大学基因组和病理学服务部，随后是下一代测序（NGS）（n=32）。通量访问阵列系统对目标外显子进行PCR扩增。使用Illumina的HiSeq2500试剂盒（200个循环）进行簇的生成和测序，并生成2x101配对末端序列读数。每位患者的肿瘤DNA均经过三个独立的技术重复处理并测序。将三个fastq文件分别与人类参考基因组hg19 NCBI build 37.2独立对齐，以生成三个BAM文件，然后合并为单个BAM文件。使用市售脚本和定制开发脚本的组合对所有四个BAM文件执行序列分析，以生成多样本VCF文件。使用Novoalign 2.08.02与人类参考基因组进行比对，使用SAMtools 0.1.18-1进行分类和索引，使用BedTools 2.13.3进行覆盖率计算，并使用Freebayes 0.9.7进行变异。如果四个BAM文件中至少有三个存在变体，则称其为变体，且平均变体等位基因频率（VAF）≥10％。帕博西尼现在一般都是建议购买老挝版，价格也很实惠，如果有需要可以联系下方微信。